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分子生物学 问答 简述基因工程的原理和过程 原理：将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，再转入另一种生物（受体）体内，使之按人们的意愿稳定遗传，表达出新产物或新性状。 不同基因具有相同的物质基础；基因是可切割的；基因是可转移的；遗传密码是通用的；基因可通过复制把遗传信息传递给下一代；肽段与基因之间存在对应关系 过程：获得目的基因；载体的选择与制备；构建基因表达载体；目的基因转入受体细胞；目的基因的检测与鉴定。 基因治疗的载体有几种？各有何优缺点？ 两种：病毒载体和非病毒载体； 病毒载体：转染效率高；但制备困难，容量小，靶向特异性差及自身免疫原性和存在生物安全问题 非病毒载体：安全，制备简单，容量大，免疫原性低，但效率不高 试述复制和转录 相同与不同之处 相同：遵循碱基互补原则；以DNA为模板；需要依赖DNA的聚合酶；合成方向5‘-3’；生成磷酸二酯键。 不同： 复制 转录 模板 两条链都复制 模板链复制 酶 DNA聚合酶 RNA聚合酶 原料 dNTP NTP 配对 A-T,C-G A-T,C-G,A-U 引物 需RNA引物 不需要 产物 子代双链DNA tRNA,mRNA,rRNA 简述真核生物mRNA的结构特点及其主要功能 大多数真核生物mRNA 会在5‘端以7甲基-鸟嘌呤及三磷酸鸟苷为起始分子结构，称为帽子结构；帽子结构在翻译起始时有促进核糖体与mRNA结合，加速翻译起始的作用，同时可以增强mRNA稳定性 在真核生物mRNA 会在3‘末端，大多数有一段长短不一的多聚腺苷酸结构，称为多聚A尾，一般有十到几十个腺苷酸链接而成。目前认为是RNA合成后加上去的，会随着mRNA存在的时间延长逐渐变短，目前认为这种3’末端结构可能与mRNA从核内向核质转位及mRNA稳定性有关 简述基因诊断的研究进展及前景 基因诊断指利用现代分子生物学和分子遗传学的原理和方法，通过检测基因的存在、结构缺陷或表达功能异常，对人体状态和疾病做出诊断的方法和过程 基因诊断已在临床遗传学，肿瘤，法医等领域有着广泛的应用，如遗传病诊断，产前诊断，DNA指纹鉴定等，目前主要的基因诊断方法有核酸分子杂交，PCR，测序及基因芯片等方法 前景：分子生物学和分子遗传学的飞速发展必将极大的促进基因诊断技术的进步，如二代，三代等测序技术的发展， 基因诊断将极大发展，如个体化用药指导等以基因诊断为基础的精准医疗将极大促进医疗进步 基因诊断的方式有很多，目前常采用的技术方法有几种？并简述其基本原理。 PCR：设计并合成一组跨越突变（缺失或插入）断裂点的引物，将待测DNA样本进行PCR扩增，然后进行琼脂糖凝胶电泳，从扩增片段的大小判断是否存在缺失或突变。 基因芯片：采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的探针固化于支持物表面，产生二维探针微阵列，然后与标记样品进行杂交，通过检测杂交信号对生物样品进行快速，并行高效的检测或诊断 直接测序：通过如高通量测序直接测出基因的序列，最准确 Southern印迹法：又称DNA印渍术，是将存在于凝胶中的DNA分子转移（印渍）于固定化介质上并加以检测分析的技术。DNA转移至固相支持体的过程中，各个DNA片段的相对位置保持不变，用放射性标记的DNA与固着于滤镜上的DNA杂交，经放射自显影锁定与探针互补的电泳条带的位置。该技术主要用于基因组DNA的分析。 限制性片段长度多态性分析：该技术利用限制性内切酶能识别 DNA分子的特异序列，并在特定序列处切开DNA分子，即产生限制性片段的特性，对于不同种群的生物个体而言，他们的 DNA序列存在差别。如果这种差别刚好发生在 内切酶的 酶切位点，并使内切酶识别序列变成了不能识别序列或是这种差别使本来不是内切酶识别位点的DNA序列变成了内切酶识别位点。这样就导致了用限制性内切酶 酶切该DNA序列时，就会少一个或多一个酶切位点，结果产生少一个或多一个的酶切片段。这样就形成了用同一种限制性内切酶切割不同物种DNA序列时，产生不同长度大小、不同数量的 限制性酶切片段。后将这些片段电泳、转膜、变性，与标记过的探针进行杂交，洗膜，即可分析其 多态性结果。 单链构象多态性诊断法： 单链构象多态性（signlestrand conformation polymorphism，SSCP）是指单链DNA由于 碱基序列的不同可引起构象差异，这种差异将造成相同或相近长度的单链DNA 电泳迁移率不同，从而可用于DNA中单个碱基的替代、微小的缺失或手稿的检测。用SSCP法检查 基因突变时，通常在疑有突变的DNA片段附近设计一对 引物进行PCR扩增，然后将 扩增物用甲酰胺等变性，并在 聚丙烯酰胺凝胶中电泳，突变所引起的DNA构象差异将表现为电泳带位置的差异，从而可据之作出诊