巫－第9章核酸的生物合成4教案资料.ppt

第十二章 核酸的生物合成;现代生物学已充分证明，核酸是生物遗传的物质基础。 除少数RNA病毒外，几乎所有的生物均以DNA为遗传信息的载体。 ;核苷酸;DNA的二级结构;? RNA是DNA的局部转录产物，RNA为单链分子，以3′，5′-磷酸二酯键相连。;1958年Crick提出中心法则(central dogma);;? 核酸的生物合成包括： DNA的生物合成：DNA复制和逆转录 RNA的生物合成：转录和RNA复制;第一节 DNA的生物合成;半保留复制（semiconservative replication） 在复制过程中，首先亲代双链解开，然后每条链作为模板，在其上合成互补的子代链，结果新形成的两个子代DNA与亲代DNA分子的碱基顺序完全一样，而且每个子代DNA分子中有一条链完全来自亲代DNA，另一条是新合成的。;? 1958年，Meselson和Stahl用15N标记E.coli. DNA，用密度梯度离心试验证明了DNA的复制是半保留复制。;15N-15N;半保留复制具有重要的生物学意义: DNA分子以半保留方式进行复制 亲代DNA的一条链保留在子代DNA分子中 使遗传信息准确的传递给子代细胞 保持其相对稳定性 而不致发生 进化上不能忍受的变化。;⑴ DNA聚合酶 ⑵ DNA模板（反转录时用RNA模板） ⑶ 引物（RNA，提供游离3′-OH） ⑷ 4种dNTP（高能底物） ⑸ Mg2+ ;2 DNA复制的条件;n1dATP + n2dGTP + n3dCTP + n4dTTP; 2. 原核生物DNA聚合酶的种类;① 5′ → 3′ 聚合酶;C (unable to pair with A);③ 5′ → 3′ 外切酶活性;Arthur Kornberg won the 1959 Nobel Prize in Medicine for his discovery of the mechanism in the biological synthesis of deoxyribonucleic acid (before Watson and Crick won theirs!);Structure of the Klenow fragment of DNA polymease I;⑵ DNA聚合酶Ⅱ;;原核生物;3. 其它主要蛋白;;（4） 单链结合蛋白（SSB）;（5） DNA连接酶（ligase）;DNA连接酶： 催化单链DNA切口共价连接。 切口上的3′-OH与5′-磷酸基必须相邻， 如果缺少一个或几个核苷酸残基，连接酶就不能将缺口弥和。 也不能将两条游离的单链连接起来。 大肠杆菌DNA连接酶供能：NAD+ 真核细胞DNA连接酶供能： ATP;4. 原核生物DNA复制过程;? 20个DnaA结合在四组9bp重复区，形成起始复合物，DNA环绕此复合物。三组13bp重复区依次变性，产生开放型复合物。DnaB（在DnaC协助下）与开放复合???结合，进一步解链。;⑵ DNA复制的延长;DNA聚合酶Ⅲ;;? 半不连续复制（semidiscontinuous replication）：DNA复制过程中，新生的DNA链一条按5′ → 3′ 方向（与复制叉移动方向一致）连续合成，另一条按5′ → 3′ 方向（与复制叉移动方向相反）不连续合成。;? 滞后链合成的模板形成环，复制叉上的二聚体DNA聚合酶Ⅲ全酶同时合成两条子链（p252）。;;;DNA polymerase I replaces the RNA primers by DNA sequences and DNA ligase seals the nicks;⑶ DNA复制的终止;DNA聚合酶Ⅲ;复制的起始 （1）复制原点：OriC序列，富含AT （2） DNA解链酶解开双链DNA。 （3） SSB结合于DNA单链。 （4） DNA旋转酶引入负超螺旋，消除复制叉前进时带来的扭曲张力。 （5）DNA引物酶(在引发体中)合成RNA引物。;复制的延伸： （6）DNA 聚合酶Ⅲ在两条新生链上同时合 成 DNA。 （7）DNA 聚合酶Ⅰ切除RNA引物，并补上 DNA。 （8）DNA ligase连接一个冈崎片段。 复制的终止： （9）形成Tus-Ter复合物 ;复制的保真性;DNA复制的真实性？ 生物体DNA复制具有高度真实性，复制108-1010碱基对，只有一个错误碱基。;思考题;? 逆转录（reverse transcription）：以RNA为模板合成DNA的过程，与通常转录过程中遗传信息流从DNA到RNA的方向相反。;? 反转录酶存在于所有致癌RNA病毒中，它的存在与RNA病毒引起细胞恶性转化有