试验一凝集试验.ppt

动物免疫学实验 免疫血清学反应的一般特点 特异性与交叉性 抗原和抗体的结合为弱能量的非共价健结合 结合温度应在0℃ ~ 40℃范围内 ,pH 在 4 ～ 9 范围内 抗原抗体反应的阶段性 第一阶段：无可见反应。 第二阶段：可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合等。 带现象 ： 前带现象 抗体过多； 后带现象 抗原过多 实验一 凝集反应 抗原、抗体的比例适当 抗原、抗体的比例与形成免疫复合物的大小 前 带 现 象 后 带 现 象 免疫血清学反应的影响因素 1. 电解质 2. 温度 3. 酸碱度 目的意义： 熟悉玻板凝集试验和试管凝集试验的操作 技术。 掌握凝集反应中阴性和阳性结果的判定。 基本原理： 细菌等颗粒性抗原与特异性抗体结合后， 在有电解质的情况下，会出现肉眼可见的凝集 块，称为凝集反应。直接凝集反应可分为玻片 凝集与试管凝集。凝集试验是疾病诊断及体内 抗体水平测定的常用方法。 凝集试验可根据抗原的性质、反应 的方式分为直接凝集试验 ( 简称凝集试 验 ) 和间接凝集试验。 凝 集 试 验 直接凝集试验 间接凝集试验 试管法 玻片法 间接凝集试验 反向间接凝集试验 分类 : 玻片法 玻片法为一种定性试验。此法简便快速， 适用于新分得细菌的鉴定或分型。也可用已 知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存 在相应抗体。 试管法 为一种定量试验，用已知抗原以检测待测 血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的含量， 以协助临床诊断或供流行病学调查。 器材及试剂 : 抗原和血清：布氏杆菌凝集抗原、 布氏杆菌标准阳性血清、 阴性血清、待检血清 生理盐水、玻片、试管、加液枪、接种环等。 实验步骤 : 一、虎红平板凝集试验： 1. 材料准备 1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清。 1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。 1.3 洁净的玻璃板，其上划分成 4 cm 2 的方格。 1.4 吸管或分装器，适于滴加 0.03 ml 。 1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。 2. 操作方法 2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应 血清 0.03 mL 。 2.2 在受检血清旁滴加抗原 0.03 m L 。 2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。 2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。 3. 判定 3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对 被检血清进行判定。 3.2 受检血清在 4 min 内出现肉眼可见凝集现象者 判为阳性 ( 十 ) ，无凝集现象，呈均匀粉红色者 判为阴性 ( 一 ) 。 玻板凝集与试管凝集的关系 玻板凝集 80μl 40μl 20μl 10μl 相当于试管凝集 1 ： 25 1 ： 50 1 ： 100 1 ： 200 二、试管凝集试验： 1. 每份血清用 4 支试管，别取对照管 3 支，共 7 支。 2. 各管按下表所示加入 0.5% 石炭酸生理盐水，后加 0.2ml 被检 血清至第一管中，混匀，吸出 1.5ml 弃去，再吸 0.5ml 至第二 管，混匀，吸 0.5ml 至第三管，依次至第四管，混匀，吸弃 0.5ml ，第五管中不加待测血清，第六管中加 1:25 稀释的布氏 杆菌阳性血清 0.5ml ，第七管中加 1:25 稀释的阴性血清 0.5ml 。