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(二)胚珠培养方法: 1、材料的选择和灭菌: 未授粉胚珠:开花前1-6天, 授粉胚珠:授粉后1-120天不等,较晚时期有利于胚的发育。 灭菌:先对子房或外表组织消毒灭菌后,后取出胚珠培养。 第六章 植物胚胎培养及离体授粉 2006-4-17 植物胚胎培养(Embryo Culture)概念: 指对植物的胚、子房、胚珠和胚乳进行离体培养,使其发育成完整植物的技术。包括胚培养(成熟胚培养、幼胚培养)、胚珠培养、子房培养、胚乳培养、试管受精等类型。 1904年Hanning最早成功培养萝卜和辣根的胚。 第一节 植物胚培养 一、胚培养的类型: 分为成熟胚培养和幼胚培养两种。 1、成熟胚培养 成熟胚为子叶期以后的胚,其在简单的培养基上即可萌发生长。对营养条件要求不严格。 主要用来繁殖不易萌发植物,或研究胚和胚乳及子叶的关系等。 台湾红豆杉成熟胚培养 牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖 Mature embryo culture and rapid propagation of tree peony 2、幼胚培养 对发育早期的胚进行培养。培养技术和条件要求较高。 以两种方式生长:继续进行胚性生长;早熟萌发。 二、胚培养的应用 1、克服远缘杂交不亲和性 如利用“胚胎拯救( Embryo rescue)”技术获得远缘杂种。 2、打破种子休眠,缩短育种周期 3、提高种子萌发率 特别是对于一些长期营养繁殖的植物种子。 三、幼胚培养方法 1、材料的选择与灭菌 确定授粉后天数与胚胎发育的相应关系,对于远缘杂种胚,要在其夭折前培养。 2、幼胚的分离及培养 分离:先取出胚珠,剥离珠被,取出完整的幼胚,后培养。 培养:胚离体培养发育时期分为异养期和自养期。在心形期转入自养生长。对于难培养的幼胚,可利用胚乳看护培养。 植物胚胎发生过程: 原胚-球形胚-心型胚-鱼雷胚-子叶胚 球形胚前期 心型胚前期 鱼雷胚 球形胚 黄瓜远缘杂种幼胎培养 四、影响胚培养的因素 (一)培养基 1、无机盐: 成熟胚培养基相对简单,如White。幼胚培养有MS、B5等,可使K+、Ca2+水平稍高。 2、碳水化合物: 糖的作用: 调节渗透压;碳源;防止幼胚早萌。 渗透压的保持对于幼胚培养相当重要。最适蔗糖浓度随着胚的发育时期而降低。 胚发育早期要求较高的的渗透压,而随着胚的发育逐渐降低。 3、植物激素的作用: 成熟胚一般不需要外源激素即可萌发。但激素能促进休眠胚的萌发。 幼胚需要外源激素,应保持外源激素与内源激素的平衡。过低则不能促进生长,过高则易导致幼胚脱分化形成愈伤。 4、天然提取物及某些蛋白制品; 银杏幼胚培养中添加银杏胚乳有促进作用(1934);曼佗罗幼胚培养中发现添加椰子乳能很好的促进幼胚的发育(200-500um的幼胚) (1941)。 此外,大麦胚乳、麦芽提取物、酵母提取物、水解酪蛋白等都能促进幼胚的发育。 (二)环境条件 1、温度: 多数为25-30℃,因植物种类有所差别。 2、光照: 一般认为黑暗或弱光条件较为合适。 (三)胚柄 在幼胚培养中,带有胚柄结构有利于幼胚的生长。但一般较难与胚一起分离出来。 第二节 植物胚乳培养 胚乳培养(Endosperm culture): 是指将胚乳组织从母体上分离出来,通过离体培养,使其发育成完整植株的技术。 胚乳在被子植物中是双受精的产物,由极核和雄配子结合成的三倍体组织。 而裸子植物胚乳在受精前形成,为单倍体。 仅40多种植物进行胚乳培养研究,20种获得再生植株,如猕猴桃等。多存在混倍现象。 胚乳培养的应用: 获得三倍体植株,用于育种利用。三倍体植株具有营养体大,无籽等特点。如无籽西瓜。 胚乳培养也会产生较多的混倍体,影响育种利用。但可用于染色体工程研究。 一、胚珠培养: 概念:在人工控制的条件下,对胚珠进行离体培养使其生长发育形成幼苗的技术。 1942首次在兰花中尝试成功,缩短了从授粉到种子成熟的时间。1980年成功培养了未授粉的非洲菊、烟草的胚珠,获得了单倍体植株。 第三节 植物胚珠和子房培养 由于幼胚分离难度大,而胚珠分离则相对容易,在幼胚培养时常采用胚珠培养。 分为两种类型:受精胚珠培养 未受精胚珠培养 植物花的结构图示 植物胚珠结构图示 (一)胚珠培养的意义: 防止杂种胚早期败育,获得杂种植株; 受精前胚珠培养,可作为试管受精的基础; 未受精胚珠培养,能培养获得单倍体植株,用于单倍体育种。 * *
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