植物细胞工程8教案资料.ppt

细胞工程（二）;一、植物细胞工程;（一）、植物细胞工程理论基础及组织培养;2-2 细胞脱分化与组织培养 组织培养(tissue culture) 指通过无菌操作分离出植物体的一部分接种到培养基上，在人工控制条件下(包括温度、湿度、光照等)进行培养的过程。 外植体(explant)：通常指被培养的上述植物离体部分。;脱分化：植株上已经分化的细胞或组织离体后在培养条件下逐渐恢复到分生状态的过程。 愈伤组织：细胞脱分化的结果通常是形成愈伤组织（未分化的细胞团）。 已经脱分化的细胞或组织在一定条件下，它们又可以经过胚状体(由体细胞形成的类似合子胚的结构)或愈伤组织再分化出芽和根，从而发育成一个完整的植株，因为在细胞的基因中，除了全套的结构基因外，还有操纵基因，使结构基因不能启动而无法工作。激素则是在一定条件下能打破操纵基因的控制，使结构基因活化。因此，它直接影响和控制细胞的分化。;（二）、植物细胞的建立与培养;（3）、接种 在无菌条件下操作，把材料放进培养基 （4）、愈伤组织的培养和诱导 ;自然条件下：通过内源生长因子、特别是植物生长素的释放，也能激发细胞分裂产生愈伤组织 人工条件下：在生长素（高浓度）和细胞分裂素（低浓度）作用下，外植体经诱导生成愈伤组织。 愈伤组织类型： ——结构致密型：表面光滑有光泽，结构致密，多为淡黄色或白色，易于再生芽 ——结构松散型：多为白色，可以用于悬浮系建立;（5）、诱导产生器官或体细胞胚 器官产生：愈伤组织形成细胞团——器官原基——形成器官（先芽后根） 体细胞胚：具有两极性，可一次性再生完整植株。 （6 ）、移栽 ;;3 植物细胞培养;1 ）愈伤组织的诱导和培养 2） 从愈伤组织到细胞株 调节培养基营养组织营养成分组成，愈伤组织在传代培养若干代后，产生细胞群，该细胞群能适应进一步的的悬浮培养，从而建立稳定的悬浮培养植物细胞系;1 步骤 选择细胞株，一般选择次生代谢物含量高的植物种类、品种或某一高产植株，利用外植体诱导出愈伤组织。 将愈伤组织转移到液体培养基中，建立悬浮细胞培养株， 并从中筛选???目标产物产量高、性能优良的无性繁殖系。 扩大培养，即把选出的“种子”接种到通气搅拌罐或进一步放大到几百升至几立方米的生物培养器中。;注意： 由于植物细胞培养的目标产物都属于次级代谢产物，要在细胞生长的后期才开始合成。因此，为了让产物产量高，一般采用二步培养法： 即使用生长培养基使细胞大量增殖，达到了一定的细胞密度，然后再改用适合细胞产物积累的培养基，促进细胞启动 次级代谢途径并提高产物的产量;;2 培养条件 （1）物理因素 光：根据植物细胞而定 温度：25 ℃左右 PH值：5～6 （2）化学因素 溶氧：植物细胞悬浮培养是好氧过程，但植物细胞的呼吸率低。选择合适溶氧度 培养基：有机碳源、含氮盐类（有时加入有机氮）、植物激素（IAA和2，4－D等）;;（四）、植物细胞培养的细胞生理特性;2. 解决对策 剪气力敏感——在减少流体剪切力和满足植物细胞良好混合之间的寻求平衡 易染菌——反应器要加强密封性，防止污染 细胞生长与次级代谢产物积累无关联——在培养基中分别进行细胞增殖和代谢物积累，或采用固定化物来控制细胞处于只积累目的代谢物的理想状态;3. 植物细胞培养工业化存在的问题 生长缓慢 次级代谢物含量低 培养细胞不稳定等 多数产物积累于胞内 不耐受剪切力 一般的说，只有当次级代谢产物的价格高于1000美元/kg时，才考虑采用植物细胞培养方法。;（五）、植物细胞培养的应用;案例; 紫杉醇存在于红豆杉属植物的树皮、叶及茎中， 其中树皮中的含量最高，大约从12000株成年紫杉树中才能提取1KG的紫杉醇，而且紫杉的生长周期很长，在世界分布很少。 紫杉醇的国际市场价格为450美元/g ; 日本有关组织从红豆杉中诱导产生愈伤组织，筛选得到细胞培养4周就增殖了5倍，紫杉醇的含量达到了0.05％，比树皮中紫杉醇的含量高达10倍。 Ketchum从6种紫杉醇属植物中进行愈伤组织的诱导，获得了产生紫杉醇的高产细胞株，在悬浮培养下，细胞内的紫杉醇含量超过了20mg/L。 清华大学化工系生物化工研究所通过固液两步培养法可以在4周内获得20g/L干物质，利用代谢调控技术在2~3天内将紫杉醇的含量提高到0.063%左右。 ;2、利用植物细胞培养生产天然色素 典型案例——紫草宁 ;紫草宁可用作创伤、烧伤以及痔疮的治疗药物，同时又因为其漂亮的紫红色而作为高级色素使用。 紫草宁产生于亚洲的多年生 植物紫草的根部 。但紫草资源严重不足，在日本，紫草已濒临灭绝，在我国，紫草（Arnebia euchrom