实验五 化脓性球菌.ppt

实验五 化脓性球菌 1.链球菌：G+，链状排列 2.淋病奈瑟菌：G-球菌，常成双排列，似咖啡豆形，大多位于中性粒细胞中 3.观察三种葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落特点 4.观察金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌在血平板上的菌落形态、大小及溶血情况 5.血浆凝固酶试验 5-1 试管法----测定游离凝固酶 5-2 玻片法----测定结合凝固酶 S.aureus B.subtilis 紫外线杀菌试验结果 细菌来源 现象 结论 空气 咽喉部 手指（其他） 土壤 细菌的分布 diameter 抗菌药物 菌种 纸片含药量 抑菌圈直径（mm） MIC（μg或U/mL） 耐药 中介 敏感 耐药 敏感 丁胺卡那（阿米卡星） 30μg ≤14 15～16 ≥17 ＞16 ≤16 氨苄青霉素 革兰阴性肠杆菌和肠球菌 10μg ≤11 12～13 ≥14 ≥32 ≤8 葡萄球菌和对青霉素G敏感者 10μg ≤20 21～28 ≥29 ＞32 ≤0.2 嗜血杆菌 10μg ≤19 ～ ≥20 ＞2 ≤2 头孢拉啶（先锋六号） 30μg ≤14 15～17 ≥18 ≥32 ≤10 庆大霉素 10μg ≤13 13～14 ≥15 ≥8 ≤4 卡那霉素 30μg ≤13 14～17 ≥18 ≥25 ≤6 青霉素G 葡萄球菌 10U ≤20 21～28 ≥29 ≥0.2 ≤0.1 其他细菌 10U ≤11 12～21 ≥22 ≥32 ≤1.5 链霉素 10μg ≤11 12～14 ≥15 ≥15 ≤6 四环素 30μg ≤14 15～18 ≥19 ≥12 ≤4 万古霉素 30μg ≤9 10～11 ≥12 ～ ≤5 甲氧西林 金葡菌 5μg ≤9 10～13 ≥14 ～ ≤3 表1 药敏试验结果读取表 化学消毒剂抑菌试验 测定纸片周围的抑菌圈直径并比较大小，其中直径最大的作为化学治疗的首选消毒剂 实验报告 1、绘图：链球菌、淋球菌，注明革兰染色性 2、记录玻片法血浆凝固酶试验的原理、方法、结果及结论 3、紫外线杀菌试验：比较并记录各区生长现象，分析紫外线的穿透力及对有芽孢和没芽孢细菌的杀灭能力。 4、完成 “细菌的分布 ”的表格内容 5、自己设计表格，记录药敏试验、化学消毒剂抑菌试验结果（包括菌种，药物名称，抑菌圈直径，细菌对抗菌药物的敏感性，选择用于治疗的药物或首选用于治疗的化学消毒剂名称） 肠道未知标本的检测 将粪拭子接种到S-S平板上，37℃培养18-24小时 实验五 化脓性球菌 通过实验，认识化脓性球菌各自的形态、菌落特征，掌握葡萄球菌产生的凝固酶的测定方法。 球菌是细菌中的一大类。对人类有致病性的病原性球菌主要引起化脓性炎症，所以称为化脓性球菌，其中革兰氏阳性菌主要包括葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌；革兰氏阴性菌包括脑膜炎球菌和淋球菌等。 * 首先我们要掌握化脓性球菌的形态。 在第一次试验中大家已经观察了葡萄球菌的形态，并画了图。葡萄球菌是中等大小、葡萄串状排列的革兰阳性球菌。这次给大家示教的是链球菌、淋球菌。链球菌是革兰阳性，链状排列的球菌，看起来像一串珍珠项链。 * 淋病奈瑟菌，俗称淋球菌，能引起淋病，是革兰阴性、成双排列的球菌，似咖啡豆形，急性炎症大多位于中性粒细胞中，慢性炎症多位于细胞外。我们看图中大的红色的团块是中性粒细胞的分叶核，箭头所指的众多小点是淋球菌，革兰染色阴性呈红色。 * 接下来我们观察金黄色、表皮、腐生葡萄球菌在普通琼脂平板上的菌落性状，主要观察产生色素的差别。金黄色葡萄球菌产生金黄色色素，菌落金黄色。表皮葡萄球菌菌落白色，腐生葡萄球菌白色或柠檬色。其中，产生金黄色色素是葡萄球菌是否有致病性的一个重要参考指标。 * 我们还要观察金葡菌及乙型溶血性链球菌（简称乙链）在血平板上的溶血情况。金葡菌产生溶血素，可以导致完全溶血，即β溶血现象，在菌落周围可看到完全透明的溶血圈。链球菌根据溶血性分为三种，甲型溶血性链球菌在菌落周围出现草绿色溶血圈，为α溶血；乙链产生完全透亮的溶血圈，为β溶血，丙型链球菌没有溶血性，菌落周围不出现溶血圈。左图和右图中可见金葡菌、乙链有β溶血性。 * 凝固酶试验 凝固酶是指葡萄球菌产生的能使加有抗凝剂的人和兔血浆凝固的酶类物质，是鉴定致病性葡萄球菌的重要指标，包括游离凝固酶和结合凝固酶。葡萄球菌凝固酶试验被广泛地用于常规鉴定金葡菌与其他葡萄球菌。 葡萄球菌所产生的凝固酶有两种：结合凝固酶和游离凝固酶。 结合凝固酶是一种结合于菌体细胞壁的酶，它直接作用于血浆中纤维蛋白原，使之变成纤维蛋白，而使葡萄球菌凝集成块。结合凝固酶用玻片法检测。游离凝固酶是凝血酶原样物质，不直接作用于血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂（即凝固酶致活因子）激活后，变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使血