第九章亲和层析.pdf

第九章 亲和纯化技术 利用生物分子间的特异性结合作用的原理进行 生物物质分离纯化的技术称为亲和纯化技术 （Affinity purification） 第九章 第一节 第二节 2 技术要点 （1）找与底物专一可 逆结合的配基； （2 ）将配基通过共价 键偶联到基质； （3 ）配基与底物吸附； （4 ）洗脱目标物。 第九章 第一节 第二节 3 亲和纯化技术 亲和层析(Affinity chromatography) 亲和过滤（膜分离） 亲和分配（双水相萃取） 亲和反胶团萃取（反胶团萃取） 亲和沉淀（沉淀） 亲和电泳（电泳） 第九章 第一节 第二节 4 第一节 亲和层析(Affinity Chromatography) 第九章 第一节 第二节 利用生物大分子物质具有与某些相应的 分子专一性可逆结合的特性而建立的层 析技术。 适用于从成份复杂且杂质含量远大于目 标物的混合物中提纯目标物。 第九章 第一节 第二节 6 特点 经过一次处理可得到高纯度活性物质； 设备要求不高、操作简便、特异性强、 分离速度快、分离效果好、分离条件温 和； 亲和吸附剂通用性较差，专用的吸附剂。 第九章 第一节 第二节 7 亲和吸附剂：载体—配基 在亲和层析中起可 逆结合的特异性物 质称为配基 （Ligand）。 与配基结合的层析 介质称为载体 （Matrix）。 第九章 第一节 第二节 8 一、亲和层析的原理 （1 ）配基固定化：配基与 载体偶联，结合成具有特异 亲和性的分离介质。 （2 ）吸附样品：亲和层析 介质选择性吸附生物活性物 质. （3 ）样品解吸：选择适宜 的条件使被吸附物活性物质 解吸。 第九章 第一节 第二节 9 第九章 第一节 第二节 10 二、亲和层析载体 （一）、亲和层析对载体的要求： （1）充分功能化，与配基进行共价连接。 （2 ）有较好的理化稳定性和生物惰性。 （3 ）具有高度的水不溶性和亲水性。 （4 ）具有多孔的立体网状结构。 （5 ）应为大小均匀的刚性小球。 第九章 第一节 第二节 11 （二）、常用载体 纤维素 (cellulose) 琼脂糖凝胶 葡聚糖凝胶 聚丙烯酰胺凝胶 多孔玻璃珠（Bio‐Glass ） 其它载体——壳聚糖 (Chitosan) 第九章 第一节 第二节 12 1、纤维素 纤维素结构紧密、均一性 差，不利于大分子的渗入。 非特异性吸附力较强，空 间位阻。 主要用于分离与核酸有关 的物质。 第九章 第一节 第二节