教案DNA的粗提取和鉴定.ppt

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* * * * * * DNA的粗提取和鉴定 优选文档 * 目的要求 1、了解从细胞中提取DNA的基本原理 2、初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法 3、观察提取出来的DNA 优选文档 * 实验思路 1、DNA从哪提取? 2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离? 3、怎样鉴定我们提取的DNA? 优选文档 * 实验原理 1. DNA在NaCl溶液中的溶解度,是随着NaCl的浓度的变化而改变的。当NaCl的物质的量浓度为0.14 mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。 2.DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的DNA。 3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂 优选文档 * 优选文档 * 实验材料和用具 实验材料: 1、鸡血细胞液(5~10ml); 2、体积分数为95%的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24h); 3、蒸馏水; 4、质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液; (抗凝剂) 5、物质的量浓度分别为2mol/L和0.015mol/L的NaCl溶液; 6、二苯胺试剂。 优选文档 * 实验用具:铁架台;铁环;镊子;三角架;酒精灯;石棉网;载玻片;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒(100ml,一个);烧杯;(100ml,一个,50ml、500ml各二个);试管(20ml,二个);漏斗;试管夹;纱布。 优选文档 * 二、DNA的粗提取与鉴定的实验设计 (一)实验材料的选取 材料:新鲜的鸡血 注意: 本实验中,要往鸡血中加入抗凝剂(柠檬酸钠溶液) 原则上只要含DNA的生物材料都可以,但是选取DNA含量相对较高的生物组织,成功率更大。 优选文档 * (1)先将新鲜的鸡血离心,获得鸡血细胞 (2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可 (二)破碎细胞,获取含DNA的滤液 1、破碎细胞 讨论:为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂? 利用了什么原理? 2、过滤,获取含DNA的滤液 优选文档 * (三)去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论:此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分? 答:可能含有核蛋白和RNA等杂质 优选文档 * 讨论:为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质 答:用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质 优选文档 * (四) DNA的析出与鉴定 DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液(体积分数为95%),静置2-3min,溶液中会出现白色丝状物,这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水 1、DNA的析出 优选文档 * 优选文档 * 2、 DNA的鉴定 鉴定DNA时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中,其中一只加入DNA丝状物,各加入二苯胺4ml 试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后,比较两只试管中溶液颜色的变化,看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色 优选文档 * (一)案例一:以鸡血为实验材料进行DNA的粗提取 三、实验案例 ②用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长 1、鸡血细胞做实验材料的原因 ①鸡血细胞核的DNA含量丰富,材料易得 优选文档 * 4、课前准备鸡血细胞液 取质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸纳溶液(抗凝剂)100ml,置于500ml烧杯中。注入新鲜的鸡血(约180ml),同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内,精置一天,使血细胞自行沉淀。(也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min(转每分)的离心机离心2min,血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液。) ①过程 优选文档 * 优选文档 * ②柠檬酸钠作用 防止血液凝固 ③作用机理 柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反应,生成柠檬酸钙络合物,血浆中游离的Ca2+大大减少,血液就不会凝固 鸡血细胞破碎以后释放出的DNA,容易被玻璃容器吸附,所以在提取过程中为了减少DNA的损失,最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液 ④注意事项 优选文档 * 讨论:提取鸡血中的DNA时,为什么除去血液中的上清液? 答:血液分为两部分,一部分是血浆,一部分是血细胞,离心后除去的上清液是血浆 5、方法步骤 将制备好的鸡血细胞液5 mL~10mL,注入到50

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