《生物制药工艺学》3预处理.pdf

第三章 生物材料的预处理、 细胞破碎和液－固分离 第一节 生物材料的预处理 生物活性物质不论在胞内胞外，浓度通常都 很低，杂质含量却很高，生理活性越高的成分其含 量往往越低。即使通过现代生物技术，目的物含量 提高，前期处理液中也会含有大量的菌体细胞、色 素、金属离子以及其他代谢物质等，需进行预处理 去除大部分杂质，提高分离纯化的效率。 一．确定预处理方法的依据 1．生物活性物质存在方式与特点 胞内：合成酶系，遗传物质，代谢中间产物， 如DNA聚合酶，CytC等 破碎细胞，结合于质膜或器膜上的，要选择 适当的溶剂使之溶解下来。 胞外：消化酶系，毒素，代谢终产物 注意：胰蛋白酶、糜蛋白酶等消化酶虽可以分泌到胞 外，但难以从消化道收集，一般都由相应腺体提取 分离。而且其在细胞内刚合成时是以无活性的酶原 形式存在的，提取时需预激活。 激活方法：提取前加入活化剂和保护剂，激活后再分 离纯化；先以酶原的形式初步提纯，再加入激活剂 等活化，再分离提纯 2．后续操作的要求 不同的提取工艺路线，对预处理和固－液分 离后的滤液的要求液不一样。  离子交换 对无机离子、灰分含量、澄清度方面要求严格  溶剂萃取 蛋白质含量低，减轻乳化现象  直接沉淀法 发酵液加草酸、净化剂、复滤、脱色 3．目的物稳定性 分离纯化过程中，目的物的生理活性处于不断 变化中，所以要把防止目的物失活放在首要！对酶 类药物的提取要防止辅酶的丢失和其他失活因素的 干扰；对蛋白质类药物要防止高级结构的破坏，即 变性作用；多肽及核酸类药物需注意酶的降解作用； 对脂类药物应特别注意防止氧化作用 二．动物材料的预处理  绞成组织肉糜： 先粗后细反复多次；冰冻状态下直接切块绞  匀浆: 玻璃匀浆器、组织捣碎器；高压匀浆器  反复冻融；  制成丙酮粉 匀浆机 三．细胞培养液的预处理 目的：  除去可溶性黏胶状物质 如核酸、杂蛋白、不溶性多糖等；  除去某些无机盐，特别是高价金属离子 1．细胞及蛋白质的处理 （1 ）加入凝聚剂 （2 ）加入絮凝剂 （3）变性沉淀 （4 ）吸附 （5 ）等电点沉淀 （6 ）加各种沉淀剂沉淀 （1 ）加入凝聚剂  原理：在某些电解质作用下，使胶体粒子的扩散双电层 的排斥电位降低，破坏了胶体系统的分散状 态，而使胶体粒子聚集的过程。（凝聚作用）  方法：加入无机盐使细胞、细胞碎片和蛋白质等胶体颗 粒发生凝聚作用而被去除  影响因素：无机盐的种类、化合价及无机盐的用量等。 高价阳离子效果好  水合硫酸铝，水合氯化铝，氯化铁，硫酸锌，碳酸镁 （2 ）加入絮凝剂 原理：絮凝剂是一种长链状结构的有机高分子 化合物，易溶于水，其分子量可达数万到一千万以 上，在长链上含有相当多的活性功能基团，可强烈 吸附胶体悬浮液中的胶粒；而且其含有许多链节， 可分别吸附在不同的颗粒表面，产生架桥联接，形 成粗大的絮凝团沉淀出来，有助于过滤。 （絮凝作用）  分类：阴离子型、阳离子型、非离子型  常用：壳聚糖、海藻酸钠、明胶、酰胺类衍 生物、聚苯乙烯类衍生物、聚丙烯酸类等  影响因素： （1 ）絮凝剂的分子量： （2 ）絮凝剂的用量： （3）溶液pH值： （4 ）搅拌速度和时间 1.絮凝剂的分子量： 大，链长，吸附架桥效果明显； 但降低溶解度 2.用量： 浓度低： 增加用量有助于架桥，提高絮凝效果； 浓度高： 过多会引起吸附饱和，在胶粒上形成覆盖层而失 去与其他胶粒架桥的作用，使胶粒更加稳定 3.PH：合适的PH有助于提高离子型絮凝剂功能团的电 离度，从而使链分子上同种电荷间的排斥作用增大， 链从卷曲状态到伸展状态，发挥最佳架桥能力 4.操作条件：刚加入絮凝剂时增