多被银莲花总皂甙导人涎腺腺样囊性癌高肺转移细胞凋亡过程中bcl-2和bax蛋白的表达及意义-口腔临床医学专业论文.docx

学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学 位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医 科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要 内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、 申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。 ，镌秘》≮ 贼雌名枷翩缉力旰骅麟翁 ＼j菇蔓：j、：。__、j：”’．‘ 河北医科大学研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中 特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究 成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。 研究生签名：玩 导师签章： 7移伞 训7年‘月乒曰’ 万方数据 mIIII]llllll]llUllllllllllllllllllllllllll mIIII]llllll]llUllllllllllllllllllllllllllJlll 目 录 Y2785362 中文摘要 1 英文摘要 ·4 研究论文 多被银莲花总皂甙诱导人涎腺腺样囊性癌高肺转移细胞凋亡 过程中Bcl．2和Bax蛋白的表达及意义 前言?丹lJ舌? 一芍一8 材料与方法 ·10 结果 ·17 附图 ·1 8 附表 ·21 讨论 ·22 结论 ·25 参考文献 ·25 综述Bcl．2基因家族及其抑制剂与肿瘤治疗研究进展 一28 致谢 36 个人简历 37 万方数据 中文摘要多被银莲花总皂甙诱导人涎腺腺样囊性癌高肺转移细胞凋亡过 中文摘要 多被银莲花总皂甙诱导人涎腺腺样囊性癌高肺转移细胞凋亡过 程中Bel．2和Bax蛋白的表达及意义 摘 要 目的：涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma，SACC) 是最常见的涎腺恶性肿瘤之一。因其浸润性强和易发生远处转移而严重危 害人类健康，因此探索新的预防治疗方法，提高对涎腺腺样囊性癌的疗效， 是广大学者研究的热点问题。 多被银莲花(Anemone Raddeana Regel)是毛莨科银莲花属植物的根 茎。药理活性研究发现，多被银莲花提取物有抗肿瘤、镇痛、镇静及拼晾 厥作用。我们前期的实验结果表明，多被银莲花总皂甙能够抑制人涎腺腺 样囊性癌高肺转移细胞(Adenoid cystic carcinoma of high pulmonary metastatic，ACC。M)的增殖，并能够诱导其凋亡。目前Bcl．2家族成员Bcl．2 及Bax蛋白在多被银莲花总皂甙诱导ACC．M细胞凋亡的过程中是否起重 要作用，尚未见国内外文献报导。本研究拟对体外培养的ACC．M细胞经 过多被银莲花总皂甙处理后，通过Western Blot方法，检测Bcl．2和Bax 不同时间点的含量，来验证多被银莲花总皂甙诱导ACC．M凋亡过程中 Bcl．2家族成员Bcl．2和Bax蛋白的表达及意义，从而为治疗腺样囊性癌 植物性化学新药的研究提供实验依据。 方法： 1材料 1．1 ACC．M 北京大学口腔医院提供，建立于1995年。 1．2多被银莲花总皂甙 购买于石家庄乐仁堂药店(产地为黑龙江省)，于河北医科大学药学 院经溶解与溶剂萃取提纯得到。 2实验方法 2．1药液制备 多被银莲花总皂甙用DMSO溶解制备成20mg／mL储存液，于．20。C冰 箱中保存，使用时用DMSO浓度小于0．001％的培养液稀释。 万方数据 中文摘要2 中文摘要 2．2细胞培养 将10％胎牛血清和链霉素(100ug／mL)、青霉素(100U／mL)放入 RPMll640培养基，置于37。C、5％C02、湿度饱和的恒温箱内培养，每24～ 48小时传1代，用O．04％EDTA和0．25％胰蛋白酶(1：1)混合液消化 并传代。 2．3细胞接种以及药物处理 用消化液将处于对数生长期的细胞消化后制成4．0x106个／mL的细胞 悬液，再将对照组、24h组、48h组、72h组，共四个培养瓶中分别接种2mL 细胞悬液，存放于培养箱。经过24小时细胞贴壁后，再进行药物处理。把 20mg／mL的多被银莲花总皂甙储存液稀释成浓度为50u卧nL的溶液，从培 养箱中取出贴壁后的细胞，把培养液丢弃，于24h，48h，72h各组中分别 加入多被银莲花总皂甙溶液2mL(浓度50ug／mL)，对照组加入二甲基 亚砜的RPMll640培养液2mL(浓度5050ug／mL)。待药物作用24、48、72 小时后，提取各组细胞组织蛋白。 2．4提取细胞组织蛋白 将每一组细胞用PBS洗涤两次，用消化液消化后制成细胞悬液，移 入相应EP管中。3000rmp，4。C