基因重组和基因工程总结贻宏。。.pdfVIP

DNA 的重组 同源性重组为在两个同源序列间进行单链或双链片段的交换。 左边为片段重组体 （切开的链与原来断裂的链是同一条）右边为拼接重组体 E.coli 的同源重组 RecA 蛋白携带单链 DNA 对双链 DNA 的入侵 RecBCD 复合物负责切开双链和对双链进行 解旋，有内切酶和外切酶和解旋酶的活性，都需要 ATP. 还需要 DNA 连接酶，和 RuvC 内 切酶进行中间体的切割。 一旦 RecBCD 识别出 Chi 序列，RecBCD 核酸酶活性便发生变化，其 3’→5’外切酶活性受到抑制，5’→3’外切酶 活性被激活，由原来优先降解 3’末端链，改变为只降解 5’末端链。RecBCD 酶活性变化的结 果是产生 3’末端带有 Chi 位点的 ssDNA 。 分支迁移由结合在 Holliday 分支点上的 RuvA 和 RuvB 蛋白催化。RuvA 以四聚体的形式识 别并结合到 Holliday 分支点上。RuvB 蛋白为催化分支迁移的解旋酶. 特异位点重组 1 λ噬菌体DNA 的整合通过整合酶识别其与大肠杆菌的重组位点内的相同序列。整合十分 高效。反转录病毒的整合酶则将 LTR （内含增强子和启动子）整合到宿主。 2. hin 基因编码倒位酶 hix （为反向重复序列）为特异性的重组位点，这个地方一重组，应该 会导致第一个启动子激活，引起 hin 基因的表达，表达的产物又连到 hix 位点上，在辅助因 子 Fis 的作用下，h 片段倒位。（h 片段位于 2 个 hix 之间，所以是 hix 先倒，再倒 H 片段） 3.免疫球蛋白的基因重排 3 个基因族 2 个编码轻链（κ和λ） 1 个编码重链 轻链有 LVJC 重链 LVJCD L 为前导片段 D 为多样性片段 VJ 和 VDJ 重排都是在特异位点，RSS 为重组信号序列， 含有回文 7 核苷酸序列，为切割位点，含富含 A 的九核苷酸序列为识别位点。RAG 为重组 酶基因，产生 2 种重组酶。第一次重组在转录前，第二次为受抗原刺激，改变恒定区，发生 类别转化。 T 细胞的基因重排也与上面相似。 转座重组 transposition 就是由插入序列和转座子介导的基因移位。 插 入 序 列 两端为两个反向重复序列。有保守性转座和复制性转座。 由转座酶起内切酶和形成磷酸二酯酶的作用，还有催化最后的位点特异性重组，在复制性转 座中。 转座子就是可以在染色体上移动的基因，对其他的基因活性进行调控。与插入序列不同的是， 它含有抗性基因等有用基因。 细菌的基因转移与重组 此为接合作用，一般为细菌染色体 外的小型环状双链 DNA 分子。 转化作用 Transformation 转导作用 Transduction 就是病毒为媒介进行 DNA 的传播。 5′ P 3′ OH 3′ OH 5′ P DNA 克隆（DNA 重组） 将遗传物质与载体 DNA 结合，形成有自我复制能力的复制子，然后通过转化或转染宿主细 胞，再筛选出含目的基因的细胞，对其进行扩增，以获得大量的 DNA 分子。 工具酶 限制性核酸内切酶 常用Ⅱ类，Ⅰ、Ⅲ类的特异性不高。识别的核苷酸序列为回文序列。切 割后产生平端切口、粘端切口。通常识别 4 、6、8 个碱基序列。 命名 同尾酶不同位点，相同末端（称配伍末端）。同裂酶不同酶，相同位点。 碱性磷酸酶能去除核酸分子末端的磷酸基团，防止载体的自连接。有 BAP （来自细菌的碱 性磷酸酶）和 CIP