苯硫脲尝味传大实验.pptVIP

LOGO 苯疏际尝味的遗传学谓查 国国国口国国 国国■ 遗传学大实验注意事项 1.实验的每一步都要详细地记录操作内容、时间、步 骤、结果等,以备查询 2.对任何自己不熟悉的实验仪器都不要随意操作(尤 象都要复时筒任课教夼汇报 的过程中发现任何意外的 3.在实验的过程中制造的任何垃圾都要丢到垃圾筐里 注惑紡蔑奔鼻的絷页和猞毒垃納躉投!特别 4实验结束后要把用过的器皿清洗后归放整齐并清点数 目,向教师汇报征得同意后方可离开实验室。 1实验目的 (1)测定人群中PTc尝味基因的表现型和基因型,理 解孟德尔遗传基因型与表现型的对应关系 (2)了解酶切扩增多态序列( cleaved amplified polymorphic sequence, CAPS) (又称为 PCR-RFLP)技术的原理,学会用CAPS技术 检测单核苷酸多态性 (SNPs)。在分子水平上测定PTc尝味的基因型 (3)计算群体中PTc尝味的基因频率,判断群体是否 达到 Hardy-weiberg平衡。 2.实验原理 NH 21苯硫脲尝味的遗传形式 苯硫脲( phenylthiocarbamide,PTc)是硫脲的苯基衍 生物(图2.1),为白色结晶粉末,因含有硫代酰胺基 (NC=S)官能团而有苦涩味。能尝1/750,000~1/50,000 PTC浓度溶液味道的人(苦涩味,少数人感到甜味)称 为苯硫脲“尝味者( taster)”;只能尝出PTc浓度大于 1/24,000溶液的味道(甚至对PTc的结晶物也尝不出苦 味)的人称为苯硫脲“味盲者( nontaster)” PTc尝味能力是受单基因控制的孟德尔遗传 性状,是由位于7号染色体上(7q357q36)的 种苦味味觉感受器基因TAS2R38决定的,属 于常染色体不完全显性遗传。尝味者中显性基因 T的纯合子(TT)能尝出1/750,000~1/6,000000 的PTc溶液的苦味,杂合子(Tt)只能尝出1/ 480,000~1/380,000的PTc溶液的苦味。因此 可以利用对PTc的尝味能力测定家族中的基因传 递和人群中的基因频率。 22人类苯硫脲尝味的基因 人类的PTc尝味基因 Homo sapiens taste receptor, type 2, member38(TAS2R38)(NM176817),又名PTC、 T2R38或T2R61。绝大多数尝味者与味盲者的区别 在于三处单核苷酸多态性( single nucleotide polymorphisms, SNPs) 第一处:145位,味盲者为G145 (编码丙氨酸ala),尝味者为C145(编 码脯氨酸pro) 第二处:785位,味盲者为T785(编 码缬氨酸va),尝味者为C785(编码丙 氨酸ala); 第三处:886位,味盲者为A886(编 码异亮氨酸le),尝味者为G886(码缬 氨酸val|) 因此味盲者PTC多肽中三处对应的氨 基酸分别是ala49、va262和ile262,被称 为AV等位基因,而尝味者的三处是pro49、 ala262和va262,被称为PAV等位基因 (图2.2,2.3)。 atgttgactc taactcgcat ccgcactgtg tcctatgaag tcaggagtac atttctgttc atttcagtcc 120 tggagtttgc agtggggttt ctgaccaaig ccitegtitI cttggtgaat ttttgggatg tagtgaagag SNP多态位点 gcaggcactg agcaacagtg attgtg gctgtgtctc agcatcagcc ggcttttcct gcatggactg ctgttcctga gtgctatcca gcttacccac ttccagaagt t gaacc actgaaccac agctaccaag ccatcatcat getatagatg attgcaaace aagccaacct etggetgL gctgectca geetgettta ctgctccaag ctcatccgtt tctctcacac cttcctgatc tgcttggcaa gctgggtctc cagg aaa tcccagatgc tcctgggtat tattctttgc tcctgcatct gcactgtcct ctgtgtttgg tgctttt t ta 上游引物 gcagacctca cttcacagtc acaactgtgc tattcatgaa taacaataca aggctdaact ggcagaataa Blbatctcaat ttattttatt cctttctctt ctgctatctg tggtctgt