荧光染料选择与数据分析详解.pptVIP

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荧光染料的选择及数据分析 张新梅 From bd biosciences BD Biosciences Pharmingen 愁BD 荧光染料的选择 BD Biosciences Pharmingen 愁BD 竹么是流式细胞仪 在流动的状态中检测颗粒 性物质各种物理及生物特 征的一种仪器; Fluorescence LBD 流式细胞仪原理 检测信号 散射光信号 前向散射光信号(FSC) 侧向散射光信号(SSC) 荧光信号 UBD BD Biosciences 流式细胞仪原理 散射光信号 当颗粒通过聚集的激光束时,激光向各个方 向散射。与激光束方向同轴的称前向角散射 光信号(FSC)。与激光束垂直的称为侧向 角散色光信号(SSC)。 light source 巴BD 流式细胞仪原理 前向角散射光信号(FSC) FSC反映细胞大小,一般来说,细胞越大 前向角散射光信号越强; FSC信号与细胞的折射率有关; 可用于表示细胞的凋亡; 区分死/活细胞时,可用于设门; UBD BD Biosciences 流式细胞仪原理 侧向角散射光信号(SSC) ·SSC信号主要反映了细胞的内部结构,内部 结构越复杂,SSC信号越强; UBD BD Biosciences 流式细胞仪原理 FSC和SSC信号用于检测并显示细胞的物 理学特征 中性粒细胞 o00 oe-ooo 单核细胞 淋巴细胞 200 Forward Scatte UBD BD Biosciences 流式细胞仪原理 荧光信号 当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过激光 東时,染料吸收光子跃迁到激发态,返回基 态时,染料释放出能量,大部分以光的形式 释放。这种发射出的光称为荧光 巴BD BD Biosciences 流式细胞仪原理 侧向款射光及荧光 (55)(FL1—F4) 前向散射光 FS BD Biosciences

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