蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定.docVIP

蛋白酶活性采用茚三酮比色法测定 称取29过lm二筛的风干土样置于IOOml三角瓶中。往三角瓶中加入 0.5ml甲苯，摇匀后放置15分钟。再加入10ml用pH7.4磷酸缓冲液配制的白明胶溶液，将瓶塞紧，小心摇荡。将三角瓶置于30℃恒温箱中，培养24h。培养结束后，将瓶中悬液用致密滤纸过滤至另一三角瓶中。吸取sml滤液于一试管中，加 0.5ml0.IN硫酸和 3ml20%硫酸钠以沉淀蛋白质，然后再过滤到另一试管中。于上述试管中加入lm120/0荀三酮溶液，将混合物仔细摇荡，并在煮沸的水浴上 加热 10min。将着色液转移到50ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度。用光电比色计于56Onm处进行比色测定。实验设无土对照和无基质对照。蛋白酶活性以24h后19土壤中酶促反应后生成的甘氨酸毫克数表示。 中性磷酸酶活性采用磷酸苯二钠比色法测定 取10.00g新鲜土壤(lmm)于 100ml容量瓶中，加入1.5ml甲苯，室温下静置15min，然后加 10ml磷酸苯二钠溶液和ZOml柠檬酸缓冲溶液，盖上瓶塞，充分混匀后，37’C下培养3h，用38.C去离子水定容至IOOml，摇匀后迅速过滤。同时做空白对照，用10ml去离子水代替磷酸苯二钠溶液。三次重复。取上述滤液卜4ml于 50ml容量瓶中，加 2.5ml缓冲液，混匀后用去离子水稀释至大约4Oml，再加0.5m12，6一二滇2424酮氯亚按溶液，室温下20一3Omin，定容至 50ml，在 600nm处比色测定。结果以24h后19土壤中释放出的酚的 mg数表示。