紫外诱变、str抗性.ppt

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紫外诱变技术及抗药性突变菌株的筛选 预习报告要求 1. 了解本实验的每一具体步骤 2. 根据每一步的要求计算所需的各种培养基的量,并确定每种培养基配制的总量及分装的要求。 3.以uv照射后达到90%的致死率,计算本实验生理 盐水的需要量。 4. 初步计算250ml三角瓶、9cm培养皿的需要量。 实验过程的主要步骤 出发菌株的培养: 对数期、浓度为107-8 CFU(个/ml) 2. 单细胞菌悬液制备:玻璃珠打散 3. 诱变处理:5ml菌悬液 4. 诱变以后的后培养: 1ml接入30ml的LB液体培养基 5. 涂布str药物平板(已知临界浓度) 培养基及其分装等 菌悬液培养:LB液体培养基(30ml/250ml三角瓶) 药物平板:采用营养琼脂+str药物(100ml/250ml三角瓶) 对诱变前后的菌悬液进行活细胞总数的计数,计算致死率。 对诱变处理前的菌悬液进行str抗性菌落计数,计算自发突变率。 对后培养以后的菌悬液进行活细胞总数和str抗性细胞数的计数,计算突变频度。 需要思考问题 为什么要制备单细胞对数期菌悬液进行诱变? 紫外诱变过程为什么要避光操作?为什么我们的操作可以在红光下进行? 后培养的目的?为什么一定要进行液体培养? 突变频度是否就是突变率? 本实验进行了哪5次计数?各次的目的是什么? 时间安排(第5周) 预备实验具体目的 确认出发菌株 E.coli 耐受链霉素的临界浓度 测试str浓度—— 8u, 9u, 10u, 12u * 下午 上午 时间 2点 1点30分 1点 2点 布置任务 清洗 8点15分 周六 周五 周四 周三 3月12日 * 请列出每天的具体实验工作内容 生试0701班育种设计实验 *

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