科研平台和科研方法.ppt

检验平台对科研的支撑作用 科研模式 人体 器官 组织 细胞 反转录 要 合成 转录 蛋白 RNA DNA 信号通路會 转录因子 调控 检验支撑平台 动物 动物器官 组织 细胞 蛋白 RNA DNA 信号通路會 转录因子 调控 、核酸提取平台 二、核酸检测平台 (一)微量核酸、蛋白定量仪 (二)PcR(聚合酶链式反应)扩增 PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法,主要由高温变性、低温退火和 适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA 双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条 人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq 酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点以单核苷酸为原料,沿 模板以5’→3方向延伸,合成DN新链这样,每一双链的DNA模板,经过一次 解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子.如此反复进 行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两 条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍。 (三)DNA重组与分子克隆 1、目的基因的获取 2、克隆载体的选择与改建 3、外源基因与载体的连接 4、重组DNA导入受体细胞 大肠杆菌 5、重组体的筛选 [8 6、重组体的复制 细菌培养 7、目的基因提取、纯化 破坏细菌,提取DNA,电泳 Chromosome dna Targe 酶切 酶切 已 连援 转化 筛选 Recombinant plasmids DNA分子克隆过程