Y1HGold单杂交酵母菌株使用说明.pdf

Y1HGold单杂交酵母菌株 编号 名称 北京华越洋生物NRR00670 Y1HGold 单杂交酵母菌株 基本信息： 名称：Y1HGold 单杂交酵母菌株 规格：300ul 甘油菌 储存温度：-80℃ 基因组： MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met–, MEL1 简介： Y1HGold 菌株是 Clontech 公司开发的 GAL4-AbA 酵母单杂系统用菌株， MATα 型，可直接转化质粒进行筛库试验。Transformation marker 为: ura3， leu2；报告基因为：AbAr 。Y1HGold -GAL4-AbA 酵母单杂系统需要两种质 粒配套使用：pAbAi 和 PGADT7。质粒pAbAi 的筛选标志为 URA，用于表 达 pBait-AbAi construct (1~3 个bait DNA 序列重复串联后克隆到pAbAi 中)； 质粒 PGADT7 的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C 端 768 ~881 位氨 基酸)与目标蛋白（Prey）的融合蛋白。GAL4-AbA 酵母单杂系统原理： Aureobasidin A (AbA)是一种环酯肽抗生素，在低浓度(0.1-0.2ug/ml) 下即 可对酵母产生毒性。基因组中整合了 pBait-AbAi 的酵母菌株 （Bait-Reporter Yeast Strains），当猎物蛋白（Prey）结合到诱饵序列（Bait DNA）上，GAL4 AD 就会激活 AbAr 的表达，从而能够在含有抗生素AbA 的培养基上生长。AbAr 与营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，可 以降低酵母单杂假阳性发生的概率。在28℃有氧的条件下，Y1HGold 菌株 在无抗性的 YPDA 上生长，使用 30%的甘油可保藏菌种。 操作说明： 1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸 取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数 的增加，细菌的活力会逐渐下降。 2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆菌落 进行后续操作。 冷冻管开封： 用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。 菌株复溶： 无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml 左右复溶液，加入到冷冻管中。 轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。 菌株复壮： 用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培养。 细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h （必要时，可适当延长培养时间）。 菌株传代： 将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量增大 接种量：如用无菌吸管吸取≥50 μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓 慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。 注意事项： 1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放 置会导致菌种衰退； 2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行； 3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能 正常生长； 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来 电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧 状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO 促 2 进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病