发酵过程控制技术 02-06谷氨酸棒杆菌的种子无菌检测 教学课件-谷氨酸棒杆菌摇瓶种子无菌检测.ppt

种子无杂菌检查的意义： 发酵过程通常是微生物纯种培养过程，培养过程中只允许特定的微生物生长，一旦发酵过程有其他微生物存在，就视为染菌，染菌严重会影响目的菌的生长，导致发酵失败。 无杂菌检查方法： 显微镜检查法 平板划线培养检查法 肉汤培养检查法 1、显微镜观察法 对于细菌，通常用革兰氏染色法，染色后在高倍显微镜下观察。 对于霉菌、酵母发酵，先用低倍镜观察生产菌的特征，然后再用高倍镜观察有否杂菌存在。 2、平板划线检查法 操作过程:倒平板→空培养→待测样品划线→培养观察 优点：能检出更少的杂菌，即灵敏度高 缺点：需要较长时间的培养（一般要过夜），操作较 繁琐。 3、酚红肉汤培养检查法 操作步骤： 无菌肉汤培养基空培养→接入种子→培养过夜 优点：能检出更少的杂菌，即结果较为准确 缺点：需要较长时间的培养（一般要过夜），操作较繁琐。 请阅读引导文，并回答以下问题： 1、革兰氏染色原理？ 2、革兰氏染色的操作步骤？ 革兰氏染色的原理： 革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易着色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上番红的颜色，因此呈现红色。 革兰氏染色步骤：初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。 1）涂片固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）自来水冲洗。 4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。 7）番红染色液（稀）染2分钟后，自来水冲洗。 8）干燥，镜检。 谷氨酸发酵条件控制-谷氨酸棒杆菌摇瓶种子无菌检测 一、谷氨酸棒杆菌一级种子质量要求 种龄：12h，pH值：6.4±0.1 光密度：净增OD值0.5以上 残糖：0.5％以下 无菌检查：(-) 噬菌体检查：(-) 镜检：菌体生长均匀、粗壮，排列整齐 革兰氏阳性反应。 二、种子质量检查 种子质量的最终指标是考察其在发酵罐中所表现出来的生产能力。因此首先必须保证生产菌种的稳定性，其次是提供种子培养的适宜环境保证无杂菌侵入，以获得优良种子。因此在生产过程中通常进行以下两项检查： （1）菌种稳定性的检查 （2）无（杂菌）检查 优点：简便、快速，能及时发现杂菌 缺点：不易检查早期杂菌 End Thanks!