高效液相色谱中理论塔板数的计算方法.doc

高效液相色谱中理论塔板数的计算方法 高效液相色谱中理论塔板数的计算方法 ?理论塔板数 (theoretical plate number,N) 用于定量表示色谱柱的分离效率 (简称 柱效 )。 b5E2RGbCAP N 取决于固定相的种类、性质 (粒度、粒径分布等 )、填充状况、柱长、流动相的种 类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并符合正态分布， N 可近似 表示为 : p1EanqFDPw N=(tR/ σ)2=16(tR)2/W =5.54(tR/W1/2)2 W: 峰宽 ; σ:曲线拐点处峰宽的一半， 即峰高 0.607 处峰宽的一半。 N 为常量时， W 随 tR 成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组份含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。 DXDiTa9E3d 用半峰宽计算理论塔板数比用峰宽计算更为方便和常用，因为半峰宽更容易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。 N 与柱长成正比，柱越长， N 越大。用 N 表示柱效时应注明柱长，，如果未注 明，则表示柱长为 1 米时的理论塔板数。 (一般 HPLC 柱的 N 在 1000 以上。 ) 若用调整保留时间 (tR’ )计算理论塔板数，所得值称为有效理论塔板数 (N 有效或 Neff)=16(tR ’/W)2 RTCrpUDGiT ?理论塔板高度 (theortical plate height,H) 每单位柱长的方差。 H= 。实际应用时 往往用柱长 L 和理论塔板数计算 :H=L/N 5PCzVD7HxA 在实际应用中能达到分离完全就可以了，塔板数超过会增加试验的时间，试验效率就会降低。 定义编辑 理论塔板数 (theoretical plate number)N ，色谱的柱效参数之一 ,用于定量表示色 谱柱的分离效率 (简称柱效 )。N 取决于固定相的种类、性质 (粒度、粒径分布 jLBHrnAILg 1 / 4 等 )、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。如果峰形对称并符合正态分布， N 可近似表示为 : xHAQX74J0X 理论塔板数 =5.54( 保留时间 / 半高峰宽 )2 (2 是平方 ) 柱效率用理论塔板数定量地表示 :N=16*(t/w )2 。其中， t 是溶质从进样到最大洗脱峰出现的时间， w 为该溶质的洗脱峰在基线处的宽度。在一色谱柱中用相同的洗脱条件时候，不同化合物的滞留时间与其洗脱峰宽度之比接近常数。因此理论 塔板数大的色谱柱效率高。当然， N 的大小和柱子长度有密切关系 :理论塔板高度 H= 柱长 /N ，用 H 可以衡量单位长度的色谱柱的效率， H 越小，则色谱柱效率越高。。。 LDAYtRyKfE N 为常量时， W 随 tR 成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组份含量相 当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。 Zzz6ZB2Ltk 用半峰宽计算理论塔板数比用峰宽计算更为方便和常用，因为半峰宽更容易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。 N 与柱长成正比，柱越长， N 越大。用 N 表示柱效时应注明柱长，，如果未注明，则表示柱长为 1 米时的理论塔板数。 (一般 HPLC 柱的 N 在 1000 以上。 ) dvzfvkwMI1 若用调整保留时间 (tR ’)计算理论塔板数，所得值称为有效理论塔板数 (N 有效或 Neff)=16(tR ’/W)2 rqyn14ZNXI 处理方法编辑 理论塔板数下降后可以考虑色谱柱再生 反相柱 分别用甲醇 :水=90:10, 纯甲醇 (HPLC 级 ),异丙醇 (HPLC 级 ),二氯甲烷 (HPLC 级)等溶剂作为流动相 ,依次冲洗 ,每种流动相流经色谱柱不少于 20 倍的色谱柱体积 .然后再 以相反的次序冲洗 . EmxvxOtOco 正相柱 2 / 4 分别用正己烷 (HPLC 级 ),异丙醇 (HPLC 级 ),二氯甲烷 (HPLC 级 ),甲醇 (HPLC 级)等溶剂做流动相 ,顺次冲洗 ,每种流动相流经色谱柱不少于 20 倍的柱体积 (异丙醇粘度大 , 可降低流速 ,避免压力过高 ).注意使用溶剂的次序不要颠倒 ,用甲醇冲洗完后 ,再以相反的次序冲洗至正己烷 .所有的流动相必须严格脱水 .SixE2yXPq5 离子交换柱 长时间在缓冲溶液中使用和进样 ,将导致色谱柱离子交换能力下降 ,.用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生 ,反之 ,用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生 . 6ewMyirQFL 另外 ,还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗 .但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的 . kavU42VRUs 如果柱子装反了 ,可以调回来 ,但可能会造成柱内担体塌陷 .在不