电泳缓冲液TAE,TBE的区别.pdfVIP

电泳缓冲液TAE,TBE 缓冲液在电泳过程中的一个作用是维持合适的pH。电泳时正极与负极都会发生电解反应，正 极发生的是氧化反应 （4OH--4e-2H2O+O2)，负极发生的是还原反应 （4H++4e-2H2)， 长时间的电泳将使正极变酸，负极变碱。一个好的缓冲系统应有较强的缓冲能力，是溶液两极的 pH保持基本不变。 电泳缓冲液的另一个作用是使溶液具有一定的导电性，以利于DNA分子的迁移，例如，一 般电泳缓冲液中应含有0.01-0.04mol/L的Na+离子，Na+离子的浓度太低时电泳速度变慢； 太高时就会造成过大的电流使胶发热甚至熔化。 电泳缓冲液还有一个组分是EDTA，加入浓度为1-2mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等离子， 防止电泳时激活 DNA酶，此外还可防止Mg2+离子与核酸生成沉淀。 TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量 （T BE中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量），且双链线状DNA在其中的迁移率较其 他两种缓冲液快约10%，电泳大于13kb的片段时用TAE缓冲液将取得更好的分离效果，此外， 回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小，长时间电泳 （如过 夜）不可选用，除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。 TBE的特点是缓冲能力强，长时间电泳时可选用TBE，并且当用于电泳小于 1kb的片段时 分离效果更好。TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用，并且因与琼脂糖相互作用生成非共价 结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收电泳中使用。 TPE的缓冲能力也较强，但由于磷酸盐易在乙醇沉淀过程中析出，所以也不宜在回收DNA 片段的电泳中使用。 50×Tris-乙酸 （TAE）缓冲液 终浓度配制 1L溶液 成分 各成分的用量 2mol/L Tris碱 242g 1mol/L 冰乙酸 57.1 ml EDTA （pH＝8.0） 18.622g （200ml的0.5 mol/L EDTA （pH 8.0）） 水 补足 1L