热原检查法(精品课件）.pptVIP

* * 第三节 热原检查法 热原（pyrogen）系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。 它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。 这里所指的“热原”，主要是指细菌性热原，是某些细菌的尸体及其代谢产物。大多数微生物都能产生热原，致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌则较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。它的化学结构是脂多糖和微量蛋白的复合物 热原的定义 热原与细菌内毒素的区别 热原物质包括了细菌内毒素，细菌内毒素是众多热原物质中的一种，也是最主要的一种。 一般来说内毒素是热原,但热原不仅仅包括内毒素。不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性。在药品生产质量管理规范（GMP）条件下，药品生产的质量控制一般可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。 热原除具有很强的致热性外，还具有下列性质： 耐热性：180℃2小时以上或250℃30min以上才能彻底破坏热原。因此，玻璃制品如生产过程中所用的容器和注射时使用的注射器等，均可用高温破坏热原。 水溶性：热原能溶于水，可用大量无热原注射用水冲洗以除去热原。 不挥发性：热原本身不挥发，但可随水蒸汽雾滴带入蒸馏水中，故用蒸馏法制备注射用水时，蒸馏水器应有隔离装置。 滤过性：热原体积极小,直径1~50nm,可通过普通滤器进入滤液中。 不耐强酸、强碱、强氧化剂：热原能被盐酸、硫酸、氢氧化钠、高锰酸钾、重铬酸钾等所破坏。 热源的性质 热原反应：热原进入机体后的数分钟至1小时内,突然发冷、寒战、面色苍白、四肢冰冷、烦躁不安等症状。持续时间约0.5~1小时。寒战消失后,随即高热,但也有无寒战期而突然高热者。病人体温迅速上升,在2~4小时体温上升至高峰,一般在39~40℃,严重者高达41℃以上,病人面色潮红、头痛、恶心、呕吐。严重者瞻妄、昏迷,甚至死亡。 热原的危害 热原检查法的定义 本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定 试验用的注射器、针头及 一切和供试品溶液接触的耐高 温器皿,应置烘箱中用250℃加 热30分钟（英国药典200℃1h） 不耐高温器皿可置于30％ 双氧水中浸泡4h，再用细菌内 毒素检查用水充分冲洗，60℃ 烘干备用 实验耗材去热原 实验动物的选择 抓取兔子的正确方法：一手抓持兔颈背部皮毛，一手托起兔臀部。 在热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃。 应避免噪音干扰。 整个试验操作过程应尽量轻柔，避免激惹动物，造成体温大幅波动，影响结果。 家兔在试验前至少1小时停止给食并置于适宜的装置中,直至试验完毕。 读取体温：一手拿住体温计尾部，使眼与体温计保持同一水平，然后慢慢地转动体温计 ，从正面看到水银柱时就可读出相应的温度值 ，切记不可用手碰触水银球端 静脉给药前需将供试品温热至38℃（美国药典37±2℃，英国药典38.5℃），注射要缓慢。 注意事项 1.试验前至少1小时停止给食并置于适宜的装置中，使其适应试验环境，饲养温度与环境温度相差≤±3℃。 2.每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次（英国药典测4次，但前2次舍去），两次体温之差不得超过0.2℃,以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。两次体温的平均值作为兔的正常体温。 2、测定其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量（10ml/kg）并温热至约38℃的供试品溶液. 3.每隔30min按前法测量其体温1次,共测6次。 4.以6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高度数，当动物升温为负值时，以0℃计算。 初 试 初试结果判断: 复试及结果判断: 传统热原检测方法的不足 内毒素法： 家兔法： 费用高 结果重复性差 使用活体动物实验 只能检测细菌内毒素 鲎（hòu）资源日益匮乏 鲎（hòu）亦称马蹄蟹。肢口纲（Merostomata）剑尾目（Xiphosura）海生节肢动物，共4种，见于亚洲和北美东海岸。虽又称马蹄蟹，但不是蟹，而与蝎、蜘蛛以及已绝灭的三叶虫有亲缘关系。 鲎(horseshoe crab)是一类与三叶虫 （现在只有化石）一样古老的动物。鲎的祖先出现在地质历史时期古生代的