- 1、本文档共22页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
酶联免疫吸附试验
免疫学检验技术
职业教育医学检验技术专业教学资源库
— * —
酶联免疫吸附试验
酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体(4种)
双抗原夹心法
间接法
竞争法测HBcAb
捕获法
— * —
酶联免疫吸附试验
间接法(测抗体最常用)
1)包被抗原 2)加适当稀释的待测标本,温育、洗涤
3)加酶标二抗,温育、洗涤 4)加底物显色
— * —
酶联免疫吸附试验
间接法 注意点
注意点:可用一种酶标二抗检测各种与抗原相应的抗体,只要求一抗是同类即可。
动画:间接法测抗体的操作步骤
— * —
提问
酶联免疫吸附试验
现分别检测一份血清中是否有针对大肠杆菌和伤寒杆菌的IgG类抗体,能否
用同一瓶酶标抗IgG抗体(酶标二抗)?
— * —
提问
酶联免疫吸附试验
现分别检测一份血清中是否有针对大肠杆菌和伤寒杆菌的IgG类抗体,能否
用同一瓶酶标抗IgG抗体(酶标二抗)?
— * —
提问
酶联免疫吸附试验
双抗原夹心法:
1)怎么绘制双抗原夹心法的原理模式图?
2)请说出双抗原夹心法的操作步骤?
3)怎么判断结果?
4)能否将两步合成一步?
5)是否容易出现钩状效应导致的假阴性结果?
— * —
酶联免疫吸附试验
双抗原夹心法
1)包被抗原
2)加待测标本,温育、洗涤
3)加酶标抗原,温育、洗涤
4)加底物显色
显色→阳性;
不显色→阴性
(载体-Ag-Ab-Ag*E)
动画:双抗原夹心法测抗体的操作步骤
— * —
酶联免疫吸附试验
1)乙肝表面抗原(HBsAg)
2)乙肝表面抗体(HBsAb)/(抗-HBs)
3)乙肝e抗原(HBeAg)
4)乙肝e抗体(HBeAb)/(抗-HBe)
5)乙肝核心抗体(HBcAb)/(抗-HBc)
乙肝两对半
— * —
酶联免疫吸附试验
竞争法测HBcAb
1)包被HBcAg(目标) 2)加待测标本(甲)和酶标抗体(乙),温育、洗涤 3)加底物显色。(载体-Ag-Ab/Ab*E)
— * —
酶联免疫吸附试验
结果判断:显色→阴性;不显色→阳性(显色深浅与待检抗原成反比)
动画:竞争法测乙肝核心抗体
(HBcAb)的操作步骤
竞争法测HBcAb
— * —
酶联免疫吸附试验
竞争法测HBeAb
1)包被HBeAb(甲) 2)加待测标本(乙)和HBeAg(目标),温育、洗涤 3)加酶标HBeAb(丙),温育、洗涤 4)加底物显色。(载体-Ab-Ag-Ab/Ab*E)
— * —
酶联免疫吸附试验
结果判断:显色→阴性;不显色→阳性(显色深浅与待检抗原成反比)
视频:乙型肝炎病毒e抗体检测(ELISA法)
动画:竞争法测乙肝e抗体(HBeAb)的操作步骤
竞争法测HBeAb
— * —
设计情景提问
酶联免疫吸附试验
今收到血清一份,半个月前患者尿道少量感染大肠杆菌(血清中有针对大肠
杆菌IgM抗体),今该患者疑似患伤寒,申请检查血清中是否有抗伤寒杆菌
的IgM类抗体,请用捕获法完成检测,为了降低抗大肠杆菌IgM的干扰,可
以采取什么措施?
— * —
酶联免疫吸附试验
捕获法测IgM
1)包被抗人IgM抗体
2)加入待测稀释血清,捕获血清中所有的IgM,
温育、洗涤
3)加入特异性Ag,温育、洗涤
4)加入针对特异性Ag的酶标抗体,温育、洗涤
5)显色,定性、定量特异性IgM
结果判断:显色→阴性;不显色→阳性
(载体-抗人IgM-IgM-特异性Ag-Ab*E)
— * —
酶联免疫吸附试验
捕获法测IgM 注意点
1)急性感染的早期诊断
2)最常用的IgM抗体检测方法
3)RF(IgM类)可致假阳性结果
4)适当稀释以减少标本中非特异性IgM的干扰
— * —
酶联免疫吸附试验
ELISA 关键技术
1)包被:将抗原或抗体固定在固相载体上的过程。
方法:抗体或蛋白质类抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,加入ELISA板孔中,在4-8℃冰箱中或37℃中保温2h。
— * —
酶联免疫吸附试验
ELISA 关键技术
2)封闭:用于包被的抗原抗体浓度低,吸收后固相表面尚有未被占据的空隙,让大量不相关蛋白质填充这些空隙的过程。
封闭剂:1%-5%牛血清白蛋白/10%小牛血清。
— * —
酶联免疫吸附试验
ELISA 注意事项
1)加样
定性:滴加液体时每滴液体体积基本相同。
定量:加样量力求准确:加在孔底,避免
气泡和溅出。
移液器
— * —
酶联免疫吸附试验
ELISA 注意事项
2)温育
时间:按说明书要
您可能关注的文档
- 楼宇设备自动化系统 楼宇设备自动化系统 集成项目图形绘制与界面配置.ppt
- 楼宇设备自动化系统 楼宇设备自动化系统 排水系统的组成及原理.pptx
- 炉外精炼技术 CAS作业具体操作1 第六节 CAS作业具体操作1.ppt
- 炉外精炼技术 根据夹杂物变形性能分类 根据夹杂物变形性能分类.pptx
- 炉外精炼技术 国内外技术发展现状 国内外技术发展现状.pptx
- 路基路面试验与检测 沥青表面处治与封层 5.1.5沥青表面处治与封层.ppt
- 路基路面试验与检测 无机结合料稳定材料无侧限抗压强度试验 考试直通车之无机结合料无测限抗压强度.pptx
- 路基施工技术 黄土地区路基 黄土地区路基.pptx
- 路桥测量 贯通误差测定与调整 5.1隧道贯通误差.ppt
- 路桥测量 卵形曲线组成 卵形曲线逐桩坐标计算.ppt
- 项目管理1_可编辑.ppt
- 2024年安徽池州市平天湖风景区管理委员会招聘编外7人历年高频考题难、易错点模拟试题(共500题)附带答案详解.docx
- 2023年12月内蒙古鄂托克旗2024年度事业单位引进37名高层次人才和紧缺专业人才笔试近6年高频考题难、易错点荟萃答案带详解附后.docx
- 2023年12月北京昌平区教委所属中小学面向应届生招考聘用教师133人笔试近6年高频考题难、易错点荟萃答案带详解附后.docx
- 2023年12月南京市教育局部分直属学校公开招聘18名编制内高层次人才紧缺人才13笔试近6年高频考题难、易错点荟萃答案带详解附后.docx
- 2023年12月北京市城市规划设计研究院招考聘用应届生笔试近6年高频考题难、易错点荟萃答案带详解附后.docx
- 2023年12月佛山市顺德区教育局面向2024届毕业生赴高校设点公开招聘教师(第二批)0笔试近6年高频考题难、易错点荟萃答案带详解附后.docx
- 2023年12月北京石景山区卫生健康委所属事业单位招考聘用笔试近6年高频考题难、易错点荟萃答案带详解附后.docx
- 2023年12月份江苏省农业科学院第一批公开招聘高层次人才35人笔试近6年高频考题难、易错点荟萃答案带详解附后.docx
- 非常全amazon平台介绍CPC.ppt
1亿VIP精品文档
相关文档
最近下载
- 针灸养生康复技术(中医养生康复技术).pdf
- 济南会计继续教育“总账会计”模拟试题.docx VIP
- 轻工制造行业专题:中粮包装收购稳步推进,格局改善提升溢价能力-240310-国联证券-13页.pdf
- 【新高考英语读后续写】模拟专练1-100(翻译+范文)共440页.pdf
- 恒达智慧基于雷视融合的城市路口智能配时系统.docx VIP
- 消防维保工作总结.docx VIP
- 测绘项目投标技术文件范例1:500数字测图项目.doc
- 人性的不同展演——《阿Q正传》《边城》比较阅读高中语文统编版选择性必修 下册.pptx
- 党支部书记培训班测试题【附答案】.docx VIP
- 大智慧:超级移动筹码分布实战教程.pdf
文档评论(0)