免疫学检验技术、教学服务模块 课件、酶联免疫吸附试验的类型(测抗体) 酶联免疫吸附试验的类型(测抗体).pptx

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酶联免疫吸附试验 免疫学检验技术 职业教育医学检验技术专业教学资源库 — * — 酶联免疫吸附试验 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体(4种) 双抗原夹心法 间接法 竞争法测HBcAb 捕获法 — * — 酶联免疫吸附试验 间接法(测抗体最常用) 1)包被抗原 2)加适当稀释的待测标本,温育、洗涤 3)加酶标二抗,温育、洗涤 4)加底物显色 — * — 酶联免疫吸附试验 间接法 注意点 注意点:可用一种酶标二抗检测各种与抗原相应的抗体,只要求一抗是同类即可。 动画:间接法测抗体的操作步骤 — * — 提问 酶联免疫吸附试验 现分别检测一份血清中是否有针对大肠杆菌和伤寒杆菌的IgG类抗体,能否 用同一瓶酶标抗IgG抗体(酶标二抗)? — * — 提问 酶联免疫吸附试验 现分别检测一份血清中是否有针对大肠杆菌和伤寒杆菌的IgG类抗体,能否 用同一瓶酶标抗IgG抗体(酶标二抗)? — * — 提问 酶联免疫吸附试验 双抗原夹心法: 1)怎么绘制双抗原夹心法的原理模式图? 2)请说出双抗原夹心法的操作步骤? 3)怎么判断结果? 4)能否将两步合成一步? 5)是否容易出现钩状效应导致的假阴性结果? — * — 酶联免疫吸附试验 双抗原夹心法 1)包被抗原 2)加待测标本,温育、洗涤 3)加酶标抗原,温育、洗涤 4)加底物显色 显色→阳性; 不显色→阴性 (载体-Ag-Ab-Ag*E) 动画:双抗原夹心法测抗体的操作步骤 — * — 酶联免疫吸附试验 1)乙肝表面抗原(HBsAg) 2)乙肝表面抗体(HBsAb)/(抗-HBs) 3)乙肝e抗原(HBeAg) 4)乙肝e抗体(HBeAb)/(抗-HBe) 5)乙肝核心抗体(HBcAb)/(抗-HBc) 乙肝两对半 — * — 酶联免疫吸附试验 竞争法测HBcAb 1)包被HBcAg(目标) 2)加待测标本(甲)和酶标抗体(乙),温育、洗涤 3)加底物显色。(载体-Ag-Ab/Ab*E) — * — 酶联免疫吸附试验 结果判断:显色→阴性;不显色→阳性(显色深浅与待检抗原成反比) 动画:竞争法测乙肝核心抗体 (HBcAb)的操作步骤 竞争法测HBcAb — * — 酶联免疫吸附试验 竞争法测HBeAb 1)包被HBeAb(甲) 2)加待测标本(乙)和HBeAg(目标),温育、洗涤 3)加酶标HBeAb(丙),温育、洗涤 4)加底物显色。(载体-Ab-Ag-Ab/Ab*E) — * — 酶联免疫吸附试验 结果判断:显色→阴性;不显色→阳性(显色深浅与待检抗原成反比) 视频:乙型肝炎病毒e抗体检测(ELISA法) 动画:竞争法测乙肝e抗体(HBeAb)的操作步骤 竞争法测HBeAb — * — 设计情景提问 酶联免疫吸附试验 今收到血清一份,半个月前患者尿道少量感染大肠杆菌(血清中有针对大肠 杆菌IgM抗体),今该患者疑似患伤寒,申请检查血清中是否有抗伤寒杆菌 的IgM类抗体,请用捕获法完成检测,为了降低抗大肠杆菌IgM的干扰,可 以采取什么措施? — * — 酶联免疫吸附试验 捕获法测IgM 1)包被抗人IgM抗体 2)加入待测稀释血清,捕获血清中所有的IgM, 温育、洗涤 3)加入特异性Ag,温育、洗涤 4)加入针对特异性Ag的酶标抗体,温育、洗涤 5)显色,定性、定量特异性IgM 结果判断:显色→阴性;不显色→阳性 (载体-抗人IgM-IgM-特异性Ag-Ab*E) — * — 酶联免疫吸附试验 捕获法测IgM 注意点 1)急性感染的早期诊断 2)最常用的IgM抗体检测方法 3)RF(IgM类)可致假阳性结果 4)适当稀释以减少标本中非特异性IgM的干扰 — * — 酶联免疫吸附试验 ELISA 关键技术 1)包被:将抗原或抗体固定在固相载体上的过程。 方法:抗体或蛋白质类抗原一般采用pH9.6的碳酸盐缓冲液作为稀释液,加入ELISA板孔中,在4-8℃冰箱中或37℃中保温2h。 — * — 酶联免疫吸附试验 ELISA 关键技术 2)封闭:用于包被的抗原抗体浓度低,吸收后固相表面尚有未被占据的空隙,让大量不相关蛋白质填充这些空隙的过程。 封闭剂:1%-5%牛血清白蛋白/10%小牛血清。 — * — 酶联免疫吸附试验 ELISA 注意事项 1)加样 定性:滴加液体时每滴液体体积基本相同。 定量:加样量力求准确:加在孔底,避免 气泡和溅出。 移液器 — * — 酶联免疫吸附试验 ELISA 注意事项 2)温育 时间:按说明书要

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