植物组织培养 植物组培生产技术应用 葡萄组织培养技术--脱毒培养.pptxVIP

植物组织培养技术葡萄组织培养与快繁技术 主讲人：姜放军湖南生物机电职业技术学院二、葡萄脱毒技术一、病毒种类　葡萄感染的病毒主要有卷叶病毒、栓皮病毒、扇叶病毒、黄脉病毒和斑点病毒等。葡萄卷叶病特征是先从基部叶片开始，叶缘向下反卷，并逐渐向其他叶子扩展。反卷后的叶片变厚变脆，叶脉间出现坏死斑或叶片干枯，叶片在秋季正常变红时间之前就开始变成淡红色。随着秋季深入，病叶变成暗红色，仅叶脉仍为绿色。 葡萄栓皮病 由一种潜隐性病毒侵染而引起。表皮粗糙而纵裂，嫁接苗木接口上下木质部出现不规则的沟槽和凸凹病状。树势逐年衰弱，生长阻滞，几年之后接穗部死亡。初夏前后，叶片上逐渐变黄，红色品种叶片由黄色变成紫红色，黄白色品种叶片由黄色变成黄褐色，叶缘向背面反卷。葡萄扇叶病是世界各地为害葡萄最严重、分布最普遍的一种病毒病。其为害特点是降低座果率，果穗松散，果粒大小不整齐，一般减产20—80%。我国栽培的一些品种，如红鸡心、龙眼、瓶儿、牛奶、巨峰、黑奥林等，都带有此种病毒。植株矮化或生长衰弱，叶片变形，严重扭曲，叶形不对称，呈环状，皱缩，叶缘锯齿尖锐。叶片变形，有时伴随着斑驳。新梢也变形，表现为不正常分枝、双芽、节间长短不等或极短、带化或弯曲等。果穗少，穗型小，成熟期不整齐，果粒小，坐果不良。叶片在早春即表现症状，并持续到生长季节结束。夏天症状稍退。植物组织培养技术无病毒苗的培育和种植作为病毒病防治的主要手段。热处理、茎尖培养、热处理结合茎尖培养 二、脱毒方法（１）热处理脱毒１．将葡萄无性系处理材料置于38℃ ，CO21200mg/Ｌ的人工气候箱中，经30min处理，较易从枝条顶端或休眠芽中除去扇叶病毒。其他病毒较难消除。２．直接将葡萄嫩茎浸泡在50 ℃ 温水中处理10~20min，可治疗皮尔斯病。（２）茎尖培养脱毒　 将感染病毒的植株在5℃下冷藏保存，以后在温度25 ℃ 、相对湿度80%、每日16h光照的条件下水培，长出的新芽剥离切取带１～３个叶原基0.2~0.3mm茎尖进行离体培养，即可获得脱毒苗。3.热处理结合茎尖培养对盆栽葡萄苗先进行热处理，再剥取茎尖培养。或者剥取茎尖后，接种于培养基，进行高温培养。三、无病毒苗的鉴定用抗血清法、电子显微镜检测法、ELISA法或指示植物进行病毒的鉴定，以确保获得脱毒苗。抗血清法：抗原与抗体间发生高度专一性的反应，称为血清学反应。把抗原注射到动物体内，引起相应特异抗体的产生。因此，利用特定病毒的抗血清，通过血清学反应即可检测该种病毒。　 电子显微镜检测法：运用电子显微镜可直接检测待检植物体内有无病毒粒体存在。 指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。四、快繁技术１．材料与消毒　 取经过热处理脱毒的枝条顶梢顶端1~2cm梢尖。去掉幼叶，先用５％的次氯酸钠溶液消毒2~3min，用无菌水冲洗３次，再在0.1%升汞溶液中浸泡2min，再用无菌水冲洗４次。 把芽放在解剖镜下，无菌条件，用镊子、刀片、解剖针等工具把芽外面的幼叶和叶原基逐层除去，使生长点暴露。用利刀切下含有１-２个叶原基，大小为0.2~0.3mm的生长点，接种于培养基上。２.培养条件　 茎尖分化与继代培养采用相同的固体培养基1/2MS+6-BA0.5mg/L+LH100mg/L+NAA0.01mg/L+GA0.2mg/L，2%的蔗糖，0.6%的琼脂，pH5.8。 生根培养1/2MS+IAA0.4mg/L+NAA0.05mg/L+IBA0.1mg/L。培养室温度25±2 ℃ ，光照度1000lx，16h的光照。3.生长与分化 接种成活的茎尖在一个月左右开始分化出芽和侧芽，两个月左右形成芽丛，即可进行大量增殖。每月继代一次，每个芽丛切成10个。４.生根培养　剪取２-３cm长的无根幼苗，正插于上述的生根培养基上，１-２周内幼苗生根，一个月形成发达的根系，同时长出５-６片新叶，生根率达90％。５．试管苗的移栽　待试管苗长出完整的根系和5-7片新叶时，把瓶子移入温室中，即可打开培养瓶。历时7天，把苗从试管中取出，洗去培养基，栽于经过干热灭菌处理的蛭石内，盘上用塑料薄膜罩严，置于散射日光下，20℃的温度，自然湿度的条件下，锻炼15d。从第五天开始，把塑料薄膜罩边缘揭开3-5mm宽的一条通风缝。以后每经过两天，把通风缝加宽一倍。到第十五天完全揭除塑料薄膜，锻炼即完成。经过锻炼，幼苗开始长出新叶及新根，便移入土中。胚胎形成和植株体形成幼苗形成及二次分化苗的构建诱导叶片分化愈伤组织，受病毒影响胚状体发生改变组培中为什么会出现褐变现象？如何解决？问题探究一、褐变的含义 褐变是指外植体在培养过程中体内的多酚氧化酶被激活，使细胞里的酚类物质氧化成棕褐色的醌类物质，这种致死性的褐化物不但向外扩散使培养基逐渐变成褐色，而且还会抑制其它的活