生物化学检验技术（2015） 总蛋白测定 血清总蛋白的测定.pptxVIP

生物化学检验技术血清总蛋白测定（Serum total protein test）概 念血清总蛋白（ total protein，TP ）: 血清中各种蛋白质的复杂混合物，可分为白蛋白和球蛋白两类。它是血清固体成分中含量最多的一类物质。正常参考值：健康成人65~85g/L。主要测定方法凯氏定氮法：用于蛋白质标准物的定值和常规方法的校准。双缩脲法：实验室测定血清TP的首选方法。凯氏定氮法历 史Johan Kjelcalhl (1849~1900)，丹麦分析化学家.1883年首创。凯氏定氮法定蛋白吸收蒸馏滴定消化用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵。（总氮量-非蛋白氮）×6.25=蛋白含量。用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使[H+]↓ ）。原 理纳氏试剂：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨含量成正比。用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发。用已标定的无机酸滴定（使[H+] 恢复），计算总氮量。凯氏定氮法：仪器展示自动凯氏定氮仪和原理图凯氏定氮法：方法评价VS缺点优点准确度高，精密度高，灵敏度高，是公认的参考方法。操作复杂，费时，影响因素多，不适合常规检测，血清各蛋白含氮量会有所变化尤其是疾病时。双缩脲法：原理两分子尿素加热缩合形成双缩脲和氨气。蛋白质分子的两个肽键在碱性条件下，与Cu2+反应在碱性条件下，与Cu2+反应在540nm处有特征吸收峰，吸光度与血清蛋白质含量成正比，由此推算TP含量双缩脲法检测蛋白质与此相似紫红色络合物紫红色络合物双缩脲法：仪器展示双缩脲试剂盒和实验视频双缩脲法：方法评价VS缺点优点操作简单，结果准确，重复性好，精密度好，线性范围宽，批内CV值＜2%。至少需要2个甲酰胺基才能与Cu2+反应，故与二肽无此反应。血清蛋白质检测临床意义血清TP升高假性蛋白增多症：严重呕吐腹泻高热大量出汗休克慢性肾上腺皮质功能减退等疾病时患者水份丢失，血液浓缩，TP升高，但是白球比例不变。合成增加：主要为球蛋白增加，比如多发性骨髓瘤。血清蛋白质检测临床意义血清TP降低营养不良丢失过多：如外伤引起大量失血合成障碍：如肝硬化血液稀释：如各种原因引起的水钠潴留其他：结核?肿瘤等Thanks