miR-194-5p对骨骼肌卫星细胞增殖分化和过氧化氢诱导小鼠成肌细胞凋亡的影响.pdfVIP

摘 要 骨骼肌生长发育是由多种基因调控的一个高度系统且复杂的生物学过程。研究表 明miRNAs 参与调控骨骼肌卫星细胞（SMSCs ）的分化、增殖和凋亡等过程。MEF2C 基因不仅是成肌细胞肌源性分化过程中的标志基因，还是 miR-194-5p 一个潜在的靶 基因。大量研究报道发现miR-194-5p 参与调控癌细胞的增殖活动，但其是否参与调 控骨骼肌细胞的增殖等活动还未见报道。 本实验以家兔的SMSCs 和成肌细胞C2C12 为研究对象，利用过表达或抑制表达 miR-194-5p 来研究其对家兔SMSCs 增殖、分化以及过氧化氢诱导C2C12 细胞凋亡的 影响。实验结果如下： 1. 测定miR-194-5p 在84 日龄新西兰兔的心，肝，脾，胃，肾，肌肉组织中的含量， 结果显示miR-194-5p 在肌肉中的表达量最高，且显著高于其他几个组织（p 0.05 ）， 表明miR-194-5p 在家兔肌肉中具有高表达的特性。 2. 预测了miR-194-5p 的靶基因，利用GO 与KEGG 对靶基因进行聚类分析，结果 表明这些靶基因富集到调控机体的生长发育的多个信号通路中。 3. SMSCs 增殖实验中，CCK-8 结果表明，miR-194-5p mimic 组的活细胞数量显著 低于NC 组(p 0.05) ；EdU 实验结果表明，miR-194-5p inhibitor 组的EdU 阳性细 胞百分数极显著高于inNC 组(p 0.01) 。表明miR-194-5p 抑制家兔SMSCs 的增殖。 4. 通过双荧光素酶报告系统成功验证了 MEF2C 是 miR-194-5p 的靶基因，并在 SMSCs 分化第 1 d ，miR-194-5p mimic 组中MEF2C 基因的表达量显著低于NC 组（p 0.05 ）。 5. SMSCs 分化实验中，miR-194-5p mimic 组中Myo G 的表达量在分化的第3，7 d 显著或极显著低于NC 组（p 0.05，p 0.01) 。表明miR-194-5p 抑制MyoG 的表达。 6. H O 诱导C2C12 凋亡后，利用流式检测miR-194-5p mimic 、NC 、inhibitor 以及 2 2 inNC 各组凋亡细胞数，结果显示mimic 组的细胞凋亡率极显著高于NC 组(p 0.01) ； 蛋白免疫印迹结果显示，mimic 组中抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达显著低于 NC 组 (p 0.05) ，inNC 组的促凋亡蛋白caspase-3 的表达量显著高于inhibitor 组（p 0.05 ）。 表明miR-194-5p 促进了H O 诱导的C2C12 细胞凋亡。 2 2 综上所述，miR-194-5p 在家兔肌肉中表达情况最高并抑制骨骼肌卫星细胞的增 殖；miR-194-5p 靶向MEF2C 并抑制MyoG 的表达；miR-194-5p 促进了H O 诱导的 2 2 I C2C12 细胞凋亡。 关键词：miR-194-5p；家兔骨骼肌卫星细胞；MEF2C ；C2C12 ；细胞凋亡 II Abstract The growth and development of skeletal muscle is a highly systematic and complex biological process regulated by a variety of genes. More and more studies have shown that miRNAs are involved in the regulation of differentiation, p