16株鲁氏耶尔森菌耐药性、耐药基因及分子分型研究.pdfVIP

摘要 鲁氏耶尔森菌（Yersiniaruckeri）是一种世界性的感染多种冷水性鱼类的重要病 原菌，给世界水产养殖业造成了严重的经济损失。为探讨四川部分区域鲁氏耶尔森 菌的耐药表型、耐药基因流行情况、基因型及亲缘关系间的差异。本试验对16株于 2015-2018年在四川部分地区分离自鲟鱼，斑点叉尾鮰，黄颡鱼的鲁氏耶尔森菌在 形态学、生理生化、rupA 基因特异性鉴定及生物分型的基础上，开展分离菌株的耐 药表型试验及耐药基因检测，并应用多位点序列分型 （MLST）和脉冲场凝胶电泳 （PFGE）两种分子分型方法研究四川部分区域鲁氏耶尔森菌基因型差异与亲缘关系。 结果显示，16株Y.ruckeri均鉴定为生物1型。 对16株Y.ruckeri采用CLSI推荐的K-B纸片法对临床常用的20种抗生素进行 TM 耐药表型测定，并采用SmartChip Real-TimePCR System 对β-内酰胺类、氨基糖苷 类、四环素类、氯霉素类、喹诺酮类、磺胺类等6类96个抗性基因进行检测，结果 显示，16 株Y.ruckeri 对头孢氨苄完全耐药；卡那霉素、复方新诺明、阿莫西林、 四环素等耐药率较高介于均在37.5%-75%；对新霉素、诺氟沙星、庆大霉素等耐药 率较低为介于12.5%-25%，且呈现出多重耐药性；共检测出39种抗生素抗性基因， 其中aac(6)-Ib(aka aacA4)-02、mphA-01、blaCMY2-01、tetC-02、blaTEM、sul1 耐 药基因较为流行，检出率分别为100%、93.75%、93.75%、87.5%、81.25%、50%。 不同宿主来源及不同地理分布的菌株其耐药基因检出结果有所差异，检出的耐药基 因结果与耐药表型结果间有一定相关性，但无绝对一致性。 MLST 分析结果显示，16株菌株MLST 分型共获得5个STs序列型（ST-5、ST-7、 ST-14、ST-18、ST-28）和1个克隆群CC-1，其中ST-14 是克隆群CC-1的主要创建 者，其他序列型和ST-14 只存在单一或多一位点的差异。各序列型分布较集中，总 体遗传变异程度小，相似度较高。PFGE 分型结果显示，UPGMA 聚类分析采用两 种不同的限制性内切酶（Sep I 和XbaI）以85%以上的相似性聚类将 16株Y.ruckeri 分别分为6个 （clusterA-F）和5 个 （clusterA-E）谱系，图谱间相似性较高，表现 出亲缘关系较近，呈现以宿主为单位较为集中的分布。 关键词：鲁氏耶尔森菌；耐药性；耐药基因；多位点序列分析；脉冲场凝胶电泳； 基因分型。 I ABSTRACT Yersinia ruckeri is a worldwide important pathogenic bacterium that can infect a variety of cold-water fishes, and cause severe economic losses to the world aquaculture industry. This study has been conducted to investigate the resistant phenotype, drug resistance genes prevalence and genotype difference and relationship of Y. ruckeri in some areas of Sichuan province. Primarily, rupA gene of Y. ruckeri was targeted through PCR for its identification. After that morphological, physiological, biochemical testing, Multilocus sequence typing (MLST) and Pulsed field gel electrophoresis (PFGE) were used to confirmed genotypes and molecular characteristic diversity of 16 Y.