高二生物学人教版选修3基因工程2课件.pptx

;Polymerase Chain Reaction，PCR聚合酶链式反应;PCR诞生的理论基础：DNA的半保留复制。;PCR的条件;PCR的条件;PCR的条件;PCR的条件;4. 细胞内DNA复制利用 提供能量，并以 作为原料。;PCR的条件;?;例题1：PCR是一种体外迅速扩增DNA片段的技术，其基本原理和过程与细胞内DNA的复制类似。下列不是两者共同点的是 ①边解旋边复制 ②遵循碱基互补配对原则 ③需要引物 ④反应条件需要高温 A．①② B．②③ C．③④ D．①④;PCR的过程;观看视频，跟随视频画出前三个循环的过程，并思考：;资料;PCR的过程;例题2： 请为下列目的基因选择引物序列，并标出子链延伸的方向。;例题3：PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述，不正确的是 A．变性破坏的是碱基对之间的氢键 B．引物与DNA模板链的结合依靠碱基互补配对原则完成 C．延伸需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与胞内复制相比所需酶的最适温度较高;PCR的应用;PCR的应用;1.以DNA扩增为基础的应用;相信同学们都看过电影《侏罗纪公园》。影片中科学家通过琥珀中保存的少量恐龙血液，扩增DNA，复制了恐龙。在电影上映的同一个月，Nature杂志发表了利用PCR技术扩增1亿年琥珀化石中象鼻虫DNA并进行基因测序的论文。;（3）协助诊断;例题4：研究者用PCR技术获得一个亨廷顿氏舞蹈症（HD，常染色体显性遗传病，随年龄增长发病，人群中罕见）家族部分成员IT15基因中的CAG重复序列片段，通过检测确定不同个体该基因的差异。检测结果如图2所示，据此结果推测Ⅳ1 ___（有/无）出现HD症状的可能，依据是__ ______。;PCR的应用;乙肝是我国重要的传染病之一，由乙肝病毒引起。目前，检测患者是否感染乙肝病毒，及感染程度，主要有抗体检测法和荧光定量PCR法。;例题5：肾上腺-脑白质营养不良是一种伴X染色体的隐性遗传病（用d表示），图1为某患者家系图。;（2）科研人员提取家系中四名女性的DNA片段并进行PCR，产物酶切后进行电泳（正常基因含一个限制酶切位点，突变基因增加了一个酶切位点）。;（3）已知女性细胞所含两条X染色体中的一条总是保持固缩状态而失活，推测失活染色体上的基因无法表达的原因是 。;综合图2与表1，推断II-3、II-4发病的原因是来自 （父方/母方）的X染色体失活概率较高，以 基因表达为主。;PCR的应用;第二步：模板链结合引物后，分别加入4个试管。;;第四步：在进行DNA扩增时，一旦ddNTP与模板链发生互补结合，子链延伸就停止了，因此得到长度不同的扩增产物。将产物进行电泳，按从下向上的顺序读取，即可完成测序。;例题6：科学家把一段T-DNA插入到A基因中，从而诱发突变，获得a基因，用PCR法确定T-DNA插入位置时，应从图1中选择的引物组合是 。;例题7：用PCR技术将DNA分子中的A1片段进行扩增，设计了引物Ⅰ、Ⅱ，其连接部位如左下图所示，x为不能与模板链引物结合部位互补配对的序列。扩增后得到的绝大部分DNA片段应是右下图中的;PCR的应用;重叠延伸PCR第一轮;重叠延伸PCR第二轮：上一轮的产物分子作为本轮的引物;重叠延伸PCR第三轮：上一轮的产物作为本轮的模板;将大量N基因片段与扩增得到的A1片段、 A3片段置于PCR反应体系中进行扩增，得到的绝大多数扩增产物是____________。;PCR的应用;小结;谢谢同学们！再见！