高中生物选修三1.2 基因工程的基本操作程序.ppt

1、从基因文库中获取（序列未知） 2、利用PCR技术扩增（基因较大，序列已知） 基因文库 基因组文库 部分基因文库－－如：cDNA文库 变性、退火、延伸、 （一）目的基因的获取 3、人工合成 (基因比较小，序列已知) 1.用一定的_______切割载体，使其出现一个切口，露出_______ 。 2.用___________切断目的基因，使其产生__________。 3.将切下的目的基因片段插入载体的______处，再加入适量___________，形成了一个重组DNA分子 限制酶 黏性末端 同一种限制酶 相同的黏性末端 切口 DNA连接酶 DNA连接酶 ——基因工程的核心 二、基因表达载体的构建 3.基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 e、复制原点 表达载体的组成 启动子：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录 终止子：终止mRNA的转录 标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来 复制原点：能起始复制并带着插入的目的基因一起复制 思考1： 表达载体为什么一定要有启动子？ （1）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能有利于基因的表达； （2）通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体细胞无法转录。 将目的基因导入受体细胞 － 转化 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 1、目的基因导入微生物细胞的方法 方法: 2、将目的基因导入植物细胞 3、将目的基因导入动物细胞 常用法：Ca2+处理 常用菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因： 繁殖快、单细胞、遗传物质少 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 1.将目的基因导入微生物细胞 思考：为什么要用Ca2+处理受体细胞？ ①特点： 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 ②原理： Ti质粒上的T-DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 1、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌转化法 适用于双子叶植物和裸子植物 ③转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 （2）基因枪法 适用于单子叶植物 （3）花粉管通道法 植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。 适用于被子植物 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 1.原核生物的基因编码区为连续的；真核生物的基因编码区为不连续的 2.mRNA无启动子和终止子以及内含子所对应的序列 3.真核生物的基因直接导入原核生物中无法表达，因为原核生物无内含子剪切系统 通过对受体菌群的培养而培养一种生物的全部基因 （每个受体菌含有一段不同的DNA片段） 1.2　基因工程的基本 　　操 作 程 序 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①RNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。 ②转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。 ③转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 1、编码区：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质的序列。 2、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、终止子），不编码蛋白质。 一、原核细胞的基因结构（补充知识） 二、真核细胞的基因结构（补充知识） 编码区 非编码区 非编码区 内含子 外显子 启动子 终止子 与RNA聚合酶结合位点 1、编码区 2、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、终止子），不编码蛋白质。 外显子：能编码蛋白质的序列 内含子：不能编码蛋白质的序列 非编码序列： 包括非编码区和内含子 真核生物转录过程 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的表达和检测 基因工程的基本操作程序 基因工程的目的基因－－ 　　主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一 些具有调控作用的因子。 与生物抗逆性相关的基因 与优良品质相关的基因 与生物药物和保健品相关的基因 与毒物降解相关的基因 与工业所需酶相关的基因 具有调控作用的因子 …… 3、人工合成 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 (基因比较小，序列已知) 基因文库 基因组文库