第2讲__微生物的培养与应用﹎.pdfVIP

第 2 讲__微生物的培养与应用 [考纲导学 ] 1.微生物的分离和培养 2.培养基对微生物的选择作用 知识梳理 | 夯实高考双基 回扣教材 一、微生物的实验室培养 1．培养基 (1)定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的 营养基质。 (2)成分：一般都含有水、碳源、氮源、无机盐，还要满足不同微生物生长 对 pH 、特殊营养物质以及氧气的要求。 (3)分类：按照物理性质可以分为液体培养基和固体培养基。 2 ．无菌技术 (1)含义：培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 (2)关键：防止外来杂菌的污染。 3．无菌技术的方法、类型和对象 (连线 ) 【答案】 (①②⑥ )— b— ( Ⅰ Ⅱ) (③④⑤ )— a— (Ⅲ Ⅳ) 4 ．大肠杆菌的纯化培养 (1)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基过程：计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 (2)纯化大肠杆菌： ①上图 A 可表示用平板划线法接种获得的平板，菌体的分离是通过连续划 1 线操作实现的。 ②上图 B 可表示用稀释涂布平板法接种获得的平板，菌体的分散是通过一 系列的梯度稀释操作实现的。 ③菌种的保存方法： a．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 b．对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1．筛选菌株 (1)寻找目的菌株的原则：根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻 找。 (2)实验室筛选尿素分解菌的方法：使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进 行培养。 (3)选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制 或阻止其他种类微生物生长的培养基。 2 ．微生物的计数 常用的方法有显微计数法和稀释涂布平板法。 3．实验流程 (1)土壤取样：富含有机质的土壤表层土。 (2)样品的稀释：通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌 落数在 30～300、适于计数的平板。 (3)微生物的培养与观察：根据菌落的特征区分微生物。 (4) 细菌的计数：统计菌落的数目，根据公式“每克样品中的菌落数＝ (C ÷V) ×M[C 代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数， V 代表涂布平板时所 用的稀释液的体积 (mL)，M 代表稀释倍数 ] ”进行计算。 4 ．分解尿素的细菌的鉴定 (1)方法：在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养分解尿素的 细菌。 (2)原理： 分解尿素的细菌 ↓ 2 脲酶 2 2 ＋H2 2 ＋2NH3 CO(NH ) O――→CO ↓ 酚红指示剂→变红色 三、分解纤维素的微生物的分离 1．纤维素酶 (1)组成： 纤维素酶是一种复合酶， 一般认为它至少包括三种组分， 即 C1 酶、 CX 酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用 C1酶 葡萄糖苷酶 纤维素― ―→纤维二糖 ――→ 葡萄糖 CX 酶 2 ．纤维素分解菌的筛选 (1)原理 ①筛选方法：刚果红染色法。 纤维素分