实验一糕点中菌落总数的测定.ppt

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实验一 糕点中菌落总数的测定 一、实验目的 1 、了解细菌总数检验的意义。 2 、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法 3 、掌握食品细菌总数的测定报告方式。 4 、熟练无菌操作技术。 二、实验材料 ? 1 、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘天 平、电炉、吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、 试管、试管架、酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或 剪刀、灭菌镊子、 75% 酒精棉球、玻璃蜡笔、登 记薄 ? 2 、培养基和试剂: 75% 乙醇、生理盐水 ( 蒸馏 水)、营养琼脂培养基。 菌落总数是指食品检样经过处理 , 在一定条件下培养后 ( 如培基 成分、培养温度和时间、 pH 、需氧性质等 ) ,所得 1mL(g) 检样 中所含菌落的总数。 本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂 上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。 菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用 这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进 行卫生学评价时提供依据。 ( 一)最先准备的器材(清洗、烘干、包扎、灭菌) *8 规格名称 数量 用途 1 、 500ml 三角瓶 1 个 稀释样品(配制生理盐水) 2 、 250ml 三角瓶 1 个 配制营养琼脂 3 、 18 × 180mm 试管 5 支 稀释样品( 9ml ) 4 、 1ml 移液管 5 支 5 、直径为 90mm 平皿 8 套 倒营养平板 6 、 250ml 量筒 1 支 7 、玻璃珠:直径约 5mm ? ? ? ? ? (二)应灭菌、消毒的器材 剪刀 1 把 不锈钢药匙 1 把 称量纸:适量 酒精消毒的器材:吸耳球 1 个,滴管胶头 5 只 (三)应制备的培养基 培养基 总量 所用容器 ? 蒸馏水 ? 平板计数琼脂 ? 稀释水: 1 瓶 1 瓶 每组 5 支 225ml/ 瓶 500ml 三角瓶 150ml/ 瓶 250ml 三角瓶 9ml/ 支 18 × 180mm 试管 A.1 平板计数琼脂( plate count agar , PCA )培养基 A.1.1 成分 胰蛋白胨 酵母浸膏 葡萄糖 琼 脂 蒸馏水 pH 7.0 ± 0.2 5.0 g 2.5 g 1.0 g 15.0 g 1000 mL A.1.2 制法 将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节 pH 。分装试管或锥形瓶, 121 ℃ 高压灭菌 15 min 。 三、实验方法 1 、检验程序 菌落总数检验程序 : 检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择 2-3 个适宜稀释度 各以 1ml 之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入 46 0 C 适量营养 琼脂→菌落数→报告 2 、 检样稀释及培养 ( 1 )以无菌操作,将检样 25g (或 25ml )剪碎以后,放于含有 225ml 灭菌 生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠) 或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成 1 : 10 的均匀稀释液。 固体检样在加入稀释液后,最好置灭菌均质器中以 8000~100000r/min 的速度处理 1min ,做成 1 : 10 的均匀稀释液。 ( 2 )用 1ml 灭菌吸管吸取 1 : 10 稀释液 1ml ,沿管壁徐徐注入含有 9ml 灭菌 生理盐水或其他稀释的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液,下 同),振摇试管混合均匀,做成 1 : 100 的稀释液。 ( 3 )另取 1ml 的灭菌吸管,按上项操作顺序作 10 倍递增稀释液,如此每递 增稀释一次,即换用 1 支 1ml 灭菌吸管。 注意: ①加入检样液时,吸管尖端不要触及瓶口或试管口外部,也不得触及管内稀 释液,并将吸管内的液体沿管壁小心流加入,以免增加检液。 ②吸管插入检样液内取样稀释时,插入深度要达 2.5cm 以上 , 调整时应使管尖 与容器内紧贴 ③每递增稀释一次,即换用另一支 1ml 灭菌吸管 ( 4 )根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择 2~3 个适宜稀释 度,分别在作 10 倍递增稀释的同时,即以吸取该稀释度的吸管移 1ml 稀释液 于灭菌平皿内,每个稀释度作两个平皿。 ( 5 )稀释液移入平皿后,应及时将凉至 46 0 C 营养琼脂培养基 [ 可放置在 (( 46 ± 1 ) 0 C )水浴锅内保温 ] 注入平皿 15ml~20mL ,并转动平皿使混合均 匀,同时将营养琼脂培养基倾入加有 1ml 稀释液(不含样品)的灭菌平皿内 作空白对照。 ( 6 )等琼脂凝固后,翻转平板,置( 36 ± 1 ) 0 C 恒温箱内培养( 48 ± 2 ) h 取 出,计算平板内菌落数目乘以倍数,即得 1g ( 1mL )样品所含菌落总数。 ①培养基不能触及平皿口边沿,加入培养基后可正反两个方向旋转,但不

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