胶体金的制备方法.pdf

一、制备胶体金的准备 （一）玻璃器皿的清洁 制备胶体金的成功与失败除试剂因素以外玻璃器皿清洁是非常关键的一步。如果玻璃器皿内 不干净或者有灰尘落入就会干扰胶体金颗粒的生成，形成的颗粒大小不一，颜色微红、无色 或混浊不透明。我们的经验是制备胶体金的所有玻璃器皿先用自来水把玻璃器皿上的灰尘流 水冲洗干净，加入清洁液（重铬酸钾 1000g,加入浓硫酸 2500ml，加蒸馏水至 10000ml）浸 泡 24h，自来水洗净清洁液，然后每个玻璃器皿用洗洁剂洗 3～4 次，自来水冲洗掉洗洁剂， 用蒸馏水洗 3～4 次，再用双蒸水把每个器皿洗 3～4 次，烤箱干燥后备用。通过此方法的处 理玻璃器皿不需要硅化处理，而直接制备胶体金。也可用已经制备的胶体金溶液，用同等大 不颗粒的金溶液去包被所用的玻璃器皿的表面，然后弃去，再用双蒸水洗净，即可使用，这 样效果更好，因为减少了金颗粒的吸附作用。 （二）试剂的配制要求 按照 Frens 法还可以制备出其它不同颗粒大小的胶体金出来。许多研究证明用该法制备胶体 金时金颗粒的大小是柠檬酸三钠用量的函数，基本的规律是柠檬酸三钠用量多，胶体金颗粒 直径小，柠檬酸三钠用量越少，腔体金颗粒直径越大。 （1）所有配制试剂的容器均按以上要求酸处理洗净，配制试剂用双蒸馏水或三蒸馏水。 （2）氯化金（HauCl 水溶液的配制：将 lg 的氯化金一次溶解于双蒸水中配成 1%的水溶液。 4 放在 4”c 冰箱内保存长达几个月至 1 年左右，仍保持稳定。 （3）白磷或黄磷乙醚溶液的配制：白磷在空气中易燃烧，要格外小心操作。把白磷在双蒸 水中切成小块，放在滤纸上吸于水份后，迅速放入已准备好的乙醚中去，轻轻摇动，等完全 溶解后即得饱和溶液。储藏于棕色密闭瓶内，放在阴凉处保存。 柠檬酸三钠还原法（Frens 1973）此方法是由 Frens 在 1973 年创立的，制备程 序很简单，胶体金的颗粒大小较一致，广为采用。该法一般先将 0.01%的 HAuCl4 溶液加热至沸腾，迅速加入一定量 1%柠檬酸三钠水溶液，开始有些蓝色，然后 浅蓝、蓝色，再加热出现红色，煮沸 7～10min 出现透明的橙红色。各种颗粒的 胶体金制备详见表 5-2 。表 5-2 柠檬酸三钠用量与胶体金颗粒直径的关系 0.01%的HAuCl （ml） 1%柠檬酸三钠 (ml) 直径（ml） 4 100 5.0 10.0 100 4.0 15.0 100 1.5 25.0 100 1.0 50.0 100 0.75 60.0 100 0.60 70.0 100 0.42 98.0 100 0.32 147.0 100 0.25 160 溶液内加入一定量的还原剂使金离子变成金原子。目前常用的还原剂有：白磷、乙醇、过氧 化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等，下面分别介绍制备不同大小颗粒的胶体金 溶液。 二、制备胶体金的方法和步骤 窄长型膜,依灵敏度及流速的要求,选用孔径不同的合适的膜.自下端至上端(由左至右) 由: 1. 样品垫 (sample pad) 2. 载有固相标记配体 (抗体或抗原)的玻璃纤维素膜条或聚酯膜条(conjugate release membrane) 3. 合适孔径的硝酸纤维素膜条 (喷涂有显示阳性结果的捕捉分析物的配体线,和阴性对照 组线)(ni-trocellulose memtrane) 4. 吸水垫(absorbent pad)等四部分衔接固定在不