柱色谱实验 课件.ppt

柱色谱实验 一、实验目的 1、学习并掌握色谱法的原理及其应用。 2、学习并掌握柱色谱的实验操作技能。 二、实验原理 色谱法亦称色层法，层析法等，是分离，纯化和鉴定 有机化合物的重要方法之一。 色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中 的吸附或溶解性能（即分配）的不同，或其它亲和作用性 能的差异，混合物的溶液流经该种物质，进行反复的吸附 或分配等作用，从而将各组分分开。 色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几个方面： （1）分离混合物（2）精致提纯化合物（3）利用比移值（Rf）鉴定化合物 ( 4 ) 跟踪反应进程 柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两类。前者常用氧化铝或硅胶为吸附剂。后者以硅胶，硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收大量的液体为固定相。当加入的洗脱剂流下时，由于不同化合物吸附能力不同，因而以不同的速度沿柱向下流动，继续洗脱时，吸附能力弱的组分随溶剂首先流出。在连续洗脱过程中，不同组分或不同色带就能分别收集，从而达到分离纯化的目的。 实物图 柱色谱 1 吸附剂 常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭或纤维素粉。 选择吸附剂的首要条件：不与被分离物或展开剂发生化学反应。 吸附能力与以下几点有关： （1）吸附剂颗粒大小 （2）吸附剂含水量 2 溶剂 通常根据被分离物中各组分的极性、溶解度和吸附活性等来考虑。先将带分离的样品溶于尽量少的非极性溶剂中，从柱顶流入柱中，依次增大溶剂的极性，将不同化合物依次洗脱。 常用洗脱剂的极性： 石油醚＜ 环己烷＜ 四氯化碳＜ 甲苯＜ 苯＜ 二氯 甲烷＜ 氯仿＜ 乙醚＜ 乙酸乙酯＜ 丙酮＜ 乙醇＜ 甲醇＜ 水＜ 乙酸 操作过程 （1）装柱 色谱柱的大小，取决于分离物的量和吸附物性质，一般的规格是柱的直径为其长度的1/10至1/4.实验中常用的色谱柱直径在0.5cm至10cm之间。 装柱要求吸附剂必须均匀地填在柱内，没有气泡、没有裂缝，否则将影响洗脱和分离。通常采用糊状填料法，即把柱竖直固定好，关闭下端活塞，底部用少量脱脂棉或玻璃棉轻轻塞紧，加入约1cm厚的洗净干燥的石英砂层，然后加入溶剂到柱体积的1/4,；用一定量的溶剂和吸附剂在烧杯内调成糊状，打开柱下端的活塞，让溶剂一滴一滴地滴入锥形瓶中，把糊状物快速倒入柱中，打开柱下端的活塞，在不断敲打柱身的情况下，填加固体吸附剂。柱填好后，上面再覆盖1cm厚的砂层。注意自始自终不要使柱内的液面降到吸附剂 高度以下，这样将会出现气泡或裂缝。柱顶部1/4处一般不充填吸附剂，以便使吸附剂上面始终保持一液层。 （2）展开及洗脱 当溶剂下降到吸附剂表面时，立即开始使用色谱柱。把试样溶解在最少量体积的溶剂中，该溶剂一般是展开色谱的第一个洗脱剂。 用滴管把试样溶液转移到色谱柱中，并用少量溶剂分几次洗涤柱壁上所沾试液，直至无色。不断加入展开剂，由于不同极性的组分在柱中移动的快慢不同，因而混合物中的各个组分在柱上分成不同的色谱带（指有颜色的组分）。使用不同的洗脱剂将色带一一洗脱下来，若洗脱速度较慢，若洗脱速度较慢，可以用水泵稍稍减压。 柱色谱分离过程（附） a. 试样溶解在最小体积的溶剂中，用滴管将试液加到吸附剂的上面； b. 试液加完并流到吸附剂上端时，立即加入展开剂进行展开，勿使溶剂的平面低于吸附剂的上端； c. 可用分液漏斗来代替连续不断地加洗脱剂。调节分液漏斗的活塞，溶剂慢慢滴下。直到水平面高于漏斗下端适当高度时，滴加停止或变缓慢。当水平面降到漏斗下端时，溶剂自动滴出或加快； d. 试样中的非极性组分很少被吸附，首先被洗脱出来，极性大的组分吸附较强，后被洗脱出来。