生物制药工艺技术 微生物代谢产物发酵制药、发酵产物的提取 发酵产物的提取.ppt

任务3 发酵产物的提取和精制 * 《生物制药工艺技术》 * 一、发酵产物的提取 （一）、吸附法 用一种吸附剂将被提取物吸附在其上，然后用一种溶液（剂）再将被吸附的物质洗脱下来。 常用的吸附剂：活性炭、氧化铝、硅胶等。 缺点：选择性不高、吸附量小。 （二）、沉淀法： 沉淀是溶液中的溶质由液相转变为固相而析出的过程。 通过沉淀达到浓缩提取物的目的，也可通过沉淀除去非必要的成分。 沉淀法的优点： 操作方便、设备简单、成本低。 沉淀法的缺点：产品的纯度较低。 沉淀法： 1、等电点沉淀法 2、不溶性盐沉淀法 3、有机溶剂沉淀法 4、盐析法 上述各种方法中，除第（3）种有机溶剂沉淀法也能适用于抗生素等小分子外，其他各种方法只适用蛋白质等大分子。 1、等电点沉淀法 酶、氨基酸和某些抗生素具有两性电离性质，当其在等电点时，由于整个分子所带正负电荷相等，这时由于分子之间的相互撞击，结合成较大的聚合体而沉淀析出。 1、等电点沉淀法 在调节等电点时，如果采用盐 酸、氢氧化钠等强酸强碱，要注意防止酶的失活或蛋白变性。为了使pH缓慢变动，也可用乙酸、碳酸等弱酸和碳酸钠等弱碱。 2、不溶性盐沉淀法 某些代谢产物在一定的pH值下，能与酸碱、金属离子形成不溶性盐而沉淀出，然后用适当的方法使该不溶性盐溶解达到分离的目的。 3、有机溶剂沉淀法 酶、蛋白质、核酸、多糖类生化物质的水溶液中加入乙醇、丙酮等水溶性的有机溶剂，它们的溶解度会显著降低，从溶液中沉淀出来。 有机溶剂沉淀的优点是：分辨率比盐析法高，溶剂容易除去并可以回收。 缺点是：易使酶变性。 3、有机溶剂沉淀法 使用有机溶剂沉淀时，操作必须在低温下进行，以减少蛋白质的变性。所用的有机溶剂须预先冷却到-10~-20℃； 有机溶剂要缓缓加入，防止溶液局部升温。中性盐会增加蛋白质在有机溶液中的溶解度，溶液中的中性盐浓度越高，沉淀蛋白质所需要的有机溶剂浓度也越大。 4、盐析法 也称中性盐沉淀法，是蛋白质提纯工作中使用最早的方法之一。 要使蛋白质沉淀，就必须破坏其水膜，中性盐的亲水性大于蛋白质的亲水性，当加入大量中性盐时，它们能夺取蛋白质表面的电荷，破坏其水膜，而使蛋白质沉淀析出。 * 《生物制药工艺技术》