二十二碳六烯酸及其氧化产物抑制前列腺癌的机制研究.pdf

摘 要 摘 要 ω3 多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated fatty acids ，PUFA ）是一种必需脂肪酸，其与 ω6 PUFA 的均衡摄入是健康的保证。然而西方化的饮食导致国民ω3 PUFA 的膳食摄入 相对于 ω6 PUFA 显著不足。这种失衡与多种疾病的发生高度相关其中包括肿瘤。由于 前列腺癌“慢性癌症的特点”，营养支持和膳食干预不论是对于其预防、转归还是预后都 有着尤为重要的意义。流行病学和本实验室前期研究均提示：ω3 PUFA 能显著抑制前列 腺炎症，抑制前列腺肿瘤的生长，减缓前列腺癌发展并提高小鼠成活率，而ω6 PUFA 却 是相反的效果。并且在ω3 PUFA 中，二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid, DHA ）对 于人前列腺癌的抑制效应较强。这提示，以DHA 为代表的ω3 PUFA 在前列腺癌的预防 和治疗领域有重要应用价值。尽管已经有一些研究报道了DHA 抗炎和抗肿瘤的作用， 但是相关机制研究的还很不足，本课题通过体内外研究发现，DHA 对于前列腺癌的抑 制作用依赖于其氧化代谢过程，并至少通过两个机制：1）DHA 经脂氧化酶（Lipoxygenase ， LOX ）氧化产生的D 型消退素（Resolvin D ，RvD ）1 和2 可以调控组织微环境中巨噬 细胞极化继而抑制炎症和肿瘤细胞的生长；2 ）DHA 通过脂氧化酶依赖及非依赖途径产 生的过氧化产物在胞内积累可直接导致肿瘤细胞发生铁死亡。论文的主要研究结果如下： （1）发现DHA 和RvD 通过调控PKA 通路调节巨噬细胞极化并抑制炎症和肿瘤：首 先在Pten-/-前列腺癌小鼠中发现膳食 DHA 在抑制小鼠前列腺癌的同时，抑制了前列腺 局部M2 样巨噬细胞的浸润。之后通过体外实验发现无论是生理浓度的DHA（1-10 μM ） 还是其氧化物 RvD （1-100 nM）都不能直接抑制前列腺癌细胞的体外增殖而在癌细胞- 巨噬细胞共培养系统中，DHA 和RvD 却能显著抑制癌细胞增殖。通过培养基转移实验 证实，RvD1 和RvD2 的抗肿瘤作用是通过抑制TAM 极化，抑制TAM 表达血管内皮生 长因子和表皮生长因子等促肿瘤因子介导的。同时，在人THP-1 细胞和小鼠骨髓来源巨 噬细胞中，RvD1 和RvD2 还通过抑制脂多糖-干扰素γ 引起的M1 极化，抑制肿瘤坏死 因子-α 等M1 型细胞因子表达；促进白细胞介素-4 介导的M2a 极化，促进IL-10 等M2a 型细胞因子表达而发挥抗炎作用。最后通过筛选RvD 受体下游G 蛋白偶联受体Gα 信 号通路，我们发现蛋白激酶A （Protein Kinase A ，PKA ）的活化在TAM ，M1 和M2a 巨 噬细胞中是显著不同的，而PKA 抑制剂能有效阻断RvD 对各种巨噬细胞极化的调控的 作用。 （2 ）发现游离 DHA 能够显著提高细胞内氧化应激水平，其脂质过氧化产物介导铁死 亡：在多种肿瘤细胞中，我们发现生理浓度的PUFA （10 μM ）本身没有细胞毒性而通过 Erastin 、RSL3 或谷氨酸诱导其过氧化产物积累则可以明显介导细胞死亡，并且这一作 用与添加的 PUFA 的不饱和度呈正相关。DHA 作为体内常见的不饱和度最高的 PUFA 具有最强的促铁死亡效应。在PC3 细胞移植瘤小鼠中，ω3 PUFA 饮食更可以显著加强 基于铁死亡的肿瘤杀伤，延长动物生命。在体外通过脂质组学和基因沉默 GPR120、酰 基CoA 合成酶长链家族成员（Acyl-CoA Synthetase Long Chain Family Member ，ACSL ） 和溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶（Lysophosphatidylcholine Acyltransferase ，LPCAT ）发现外 I 摘 要 源性DHA 可以以胞内游离脂肪酸形式发生过氧化。使用抑制剂，基因沉默和基因过表 达的方式从正反两个方面可以证实DHA 的过氧化弄够同时由LOX 依赖的（ALOX5 和 ALOX15 ）和LOX 非依赖的途径介导。 （3 ）发现DHA 参与的铁死亡过程中，RIPK1- SQSTM1/p62-GSDMD 是一重要致死信