病理检验技术、教学服务模块 1.结缔组织和肌纤维染色法法、教学课件、课件 结缔组织和肌纤维 —胶原纤维.pptx

病理检验技术;特殊染色;结缔组织在广义上包括多种组织成分,狭义上是指其含有的三种纤维,即胶原纤维、网状纤维和弹性纤维。 这三种纤维广泛分布于身体各处,常见于器官与器官之间,组织与组织之间以及细胞与细胞之间。 这些纤维具有支持连接、营养、防御保护和创伤修复等功能。 这三种纤维在苏木精-伊红(HE)染色中有时难以区别,特别是在某些病理改变时。因此在病理诊断上常常要借助于特殊染色进行鉴别。; 胶原纤维 胶原纤维(?collagen?fiber)是三种纤维中分布最广,含量最多的一种纤维。它广泛分布于各脏器内。在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。 胶原纤维具有韧性大、抗拉力强的特点。在弱酸或沸水中可慢慢溶化成胶水,称为白明胶,所以这种纤维称为胶原纤维。胶原纤维在新鲜时无色,粗细不等,直径在1~12um之间,并有分支,互相交织成网。在电镜下胶原纤维是由更细长的胶原原纤维集合成束而成。 ;已知胶原纤维又可分为十几型,胶原分子呈棒状,由三股同质或异质性螺旋形多肽链组成,其中Ⅰ型主要是骨、皮肤和肌腱胶原,Ⅱ型主要是软骨胶原,Ⅲ型主要在胚胎组织以及成人血管、胃肠道,Ⅳ型只见于基膜等。通过用苦味酸-天狼星红法在偏振光显微镜下可见Ⅰ型胶原纤维呈双折射为橘黄色或亮红色的粗纤维,Ⅲ型胶原纤维呈弱双折射为绿色的细纤维,Ⅱ型胶原纤维在偏振光中不显色。;胶原纤维染色在病理诊断上主要用于和肌纤维的鉴别。常用于显示胶原纤维的方法有改良?Van Gieson苦味酸丽春红S法(简称改良V.G.法)、?Masson三色法和Mallory三色法等。所谓三色染色通常是指染胞核和能选择性地显示胶原纤维和肌纤维。其实V.G.法也是一种三色法,不过习惯上不称三色法。;苦味酸丽春红S法(V.G.法)(改良?Van Gieson);取一只三角烧瓶盛蒸馏水,加入硫酸铁铵,用玻璃棒搅动使其完全溶解。加入天青石蓝B,继续用玻璃棒搅匀,以文火煮沸2-3分钟,在煮沸时应用玻璃棒不停轻轻搅动,否则天青石蓝将沉积于瓶底成团块状。待冷却后过滤于小口砂塞瓶,再加入甘油和麝香草酚,置4℃冰箱可保存1年以上。 临用前半小时由冰箱取出恢复至室温。为方便操作可倾入一小滴瓶内使用。;2.?Mayer苏木精染???苏木精(ematoxylin) 0.1g蒸馏水 100ml碘酸钠(sodium?iodate) 20mg硫酸铝铵(aluminum?ammonium?sulphate)5g柠檬酸(citric?acid) 0.1g水合氯醛(chloral?hydrate) 5g;取一只200ml洁净三角烧瓶盛蒸馏水,加入苏木精并轻轻摇动使完全溶解(可稍加温至约50℃),再加入碘酸钠及硫酸铝铵,用玻璃棒轻轻搅动使硫酸铝铵完全溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,此时溶液呈淡红紫色,过滤于小口砂塞瓶内。保存和使用同天青石蓝液。 ;3. 1%的盐酸乙醇液 70%的乙醇 99ml 纯盐酸(?hydrochloric?acid) 1ml4. 1%的丽春红S(ponceau?S）5. 苦味酸(?picric?acid)饱和水溶液 取蒸馏水100ml,加入苦味酸约2g即成苦味酸饱和水溶液。;6.改良?Van Gieson(改良V.G.)染液甲液：1%的丽春红S 1ml乙液：苦味酸饱和水溶液 9ml甲乙两液临用前按比例混合,混合液一次性使用,不能保存。;(二)染色步骤1.组织固定于10%的甲醛液中,常规脱水包埋。2.切片厚4um,常规脱蜡至水。3.天青石蓝液滴染2~3分钟。4.稍水洗。5.Mayer苏木精液滴染2~3分钟。6.稍水洗。;7. 1%的盐酸乙醇分化1-2秒。8.流水冲洗10分钟。9.改良?Van Gieson液滴染1~2分钟。10.急速用水洗一下,即用95%的乙醇快速分化。11.无水乙醇脱水(I)、(Ⅱ)、(Ⅲ)各数秒钟,二甲苯透明(I)、(Ⅱ)、(Ⅲ)各1~2分钟。 12.中性树胶封固。 ;;(四)注意事项1. 苦味酸水溶液的饱和度约1.2%,其干燥纯品在高温或受撞击时会发生爆炸,为安全起见,厂商在出售时会加入水分35%以上,故在配制其饱和液时在100ml蒸馏水中加入含水的苦味酸约2g