Steap家族在肠视网膜轴巨噬细胞中的调控机制研究.pdf

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摘要 摘 要 目的:通过构建肠黏膜免疫紊乱的肠-视网膜神经损伤模型,明确肠黏膜免疫 紊乱引起的视网膜损伤表型,以及Microglia / Macrophage 在免疫-神经损伤中的作 用,并进一步研究 Steaps 对 Microglia / Macrophage 功能的影响,从而揭示 Steaps 调控的 Microglia / Macrophage 在肠-视网膜损伤中的免疫调节机 ,为肠脑轴相关 疾病的免疫机制探索提供参考。 方法:构建 DSS 诱导的肠-视网膜损伤小鼠模型,通过 ERG 检测视网膜功能 变化,免疫荧光染色检测视网膜结构损伤情况。利用流式细胞术和免疫荧光染色 + 明确视网膜浸润免疫细胞的数量和定位。特异性抗体干预实验,验证 CD4 T 细胞 对视网膜的神经损伤,以及Microglia 细胞对视网膜免疫损伤的调节作用。体外通 过 BV2 细胞系,研究 Steap4 对 Microglia 细胞功能的影响,同时构建Steap4-/-小鼠, 进一步确认 Steap4 之于 Microglia / Macrophage 的调节作用,以及对视网膜功能的 影响。 结果:1)我们成功构建了 DSS 诱导的肠黏膜免疫紊乱小鼠模型。ERG 检测 显示,肠黏膜免疫紊乱小鼠视网膜 ERG a、b 波振幅都出现了不同程度的下调, 振荡电位也显著降低,且 b 波出现明显的反应延迟。2 )HE 结果发现,模型小鼠 视网膜内核层明显变薄,细胞排列较为松散,但与对照组相比,外核层并无显著 变化。3 )免疫荧光染色结果可知,DSS 诱导的肠黏膜免疫紊乱小鼠视网膜双极细 胞严重受损,出现明显的胞体丢失和纤维断裂,双极细胞两端连接 RGC 和感光细 胞的突触也出现连接异常;此外还有节细胞凋亡增加,神经纤维紊乱增多。4 )肠 黏膜免疫紊乱小鼠视网膜外核层变化不大,截止到第 50 天,仅出现了外节的异常 伸长。5 )眼底血管成像显示喂食 DSS 到 50 天,并未有视网膜血管的渗漏和病理 性增生。6 )流式细胞术和免疫荧光染色分析,肠黏膜免疫紊乱诱发视网膜小胶质 细胞增殖活化水平提高,并伴有外周巨噬细胞的浸润。7 )实时荧光定量 PCR 显示, 肠黏膜免疫紊乱小鼠视网膜促炎性细胞因子 Tnfa、Il1b 、Ifng 和 Il17a 和趋化因子 Cxcl9、Cxcl10、Cxcl11 及趋化因子受体 Cxcr3 基因表达水平均显著升高。8 )流式 + 细胞术和免疫荧光染色结果发现肠黏膜免疫紊乱小鼠视网膜 CD4 T 细胞异常浸 + 润,并主要分布为视网膜内层;CD4 特异性抗体干预,能够显著降低外源性 CD4 + T 细胞靶向视网膜,改善视网膜免疫微环境,缓解视网膜神经损伤。9 )浸润的 CD4 T 细胞表面表达趋化因子受体 CXCR3 ;CXCR3 抗体干预,可一定程度上减少外源 T 细胞靶向视网膜的趋化作用,从而缓解肠黏膜免疫紊乱小鼠视网膜的功能损伤。 10)通过视网膜铺片的血管荧光染色,我们发现肠黏膜免疫紊乱小鼠三层视网膜 I 摘要 + 血管都高表达 MAdCAM-1,并伴有 CD4 T 细胞的跨血管内皮细胞转运。11)实 + 时荧光定量 PCR 和免疫荧

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