保健食品中茶氨酸的测定.pdfVIP

十一、保健食品中茶氨酸的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中茶氨酸的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于红茶、绿茶等及以茶氨酸为主要原料的保健食品中茶氨酸含量的测定。 2 原理 试样经水提取，使用等度洗脱，采用配有二极管阵列检测器或紫外检测器的高效液相色 谱仪检测，以保留时间定性，外标法定量。 3 试剂和材料 注：水为GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 三氟乙酸 （CF COOH ），色谱纯。 3 3.2 标准品 茶氨酸标准样品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见表 1，纯度≥98% ，或经国家认 证并授予标准物质证书的标准物质。 表1 茶氨酸标准样品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 茶氨酸 L-theanine 3081-61-6 C H N O 174.20 7 14 2 3 3.3 标准溶液配制 3.3.1 茶氨酸标准储备液：称取35.0mg 茶氨酸标准品（精确到0.1mg ），用水溶解后，移入 10mL 容量瓶，用水定容至刻度，此溶液浓度为3.5mg/mL 。贮存于4 ℃冰箱中，有效期3 个 月。 3.3.2 茶氨酸标准系列工作液：分别准确吸取茶氨酸标准储备液（3.3.1 ）0.2mL 、0.4mL 、0.6mL 、 0.8mL 、1.0mL，移入 10mL 容量瓶，用水定容至刻度。得到浓度分别为 0.070mg/mL 、 0.14mg/mL 、0.21mg/mL 、0.28mg/mL 、0.35mg/mL 茶氨酸标准使用液。临用时配制。 3.4 三氟乙酸水溶液：取水加三氟乙酸（3.1.1 ），调至pH3.0 ，经微孔滤膜（3.5 ）过滤，待 用。 3.5 微孔滤膜：0.45µm ，水相。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2 恒温水浴锅。 4.3 离心机：转速≥8000r/min 。 4.4 分析天平：感量分别为0.0001g 和0.001g 。 47 4.5 pH 计。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 固体试样的处理：称取粉碎试样适量（精确至0.001g ，相当于含茶氨酸10mg），加水 30mL ，在80℃的恒温水浴锅上加热40min ，冷却，离心，过滤后，转移至50mL 容量瓶， 用水定容至刻度，混匀。试样溶液经微孔滤膜（3.5 ）过滤，滤液进液相色谱仪分析。 5.1.2 液体试样的处理：取一定量的试样在水浴锅上蒸干，残渣用水溶解，转移至 10mL 容 量瓶，用水定容至刻度，混匀。试样溶液经微孔滤膜（3.5 ）过滤，滤液进液相色谱仪分析。 5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱柱：C18 柱， 250mm×4.6mm ，5μm，或性能相当者。 5.2.2 流动相：三氟乙酸水溶液（3.4 ）。 5.2.3 流速：1.0mL/min 。 5.2.4 柱温：35℃。 5.2.5 检测波长：203nm 。 5.2.6 进样量：10μL。 5.3 标准曲线的制作 将标准系列工作液（3.3.2 ）分别按液相色谱参考条件（5.2 ）进行测定，得到相应的茶 氨酸标准溶液的色谱峰面积（峰高），以标准工作液的浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积（峰 高）为纵坐标，绘制标准曲线。 5.4 试样溶液的测定 将试样溶液（5.1 ）按液相色谱参考条件（5.2 ）进行测定，得到相应的样品溶液茶氨酸 的色谱峰面积（峰高），根据标准曲线得到待测液中茶氨酸的浓度，平行测定次数不少于两 次。 茶氨酸的标准液相色谱图参见附录A 的图A.1 。 6 结果计算 试样中茶氨酸含量按下式计算： C  V  100 X m  1000 式