保健食品中腺苷的测定.pdfVIP

十三、保健食品中腺苷的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中腺苷的高效液相色谱测定方法。 本方法适用于保健食品中腺苷的含量测定。 2 原理 试样经水超声提取，用高效液相色谱仪进行测定，以保留时间定性，峰面积外标法定量。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 磷酸二氢钾（KH PO ）。 2 4 3.1.2 甲醇（CH OH ）：色谱纯。 3 3.1.3 硅藻土（SiO ）：化学纯，粒径范围：0.2-0.8mm 。 2 3.2 标准品 腺苷标准样品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见表 1，纯度≥98% ，或经国家认证 并授予标准物质证书的标准物质。 表1 腺苷标准样品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 腺苷 Adenosine 58-61-7 C H N O 267.24 10 13 5 4 3.3 标准溶液配制 3.3.1 腺苷标准储备液：称取10mg （准确至0.01mg ）腺苷标准品（3.2 ）于10mL 容量瓶 中，用水溶解并定容至刻度，摇匀。此溶液浓度为1.0mg/mL。 3.3.2 腺苷标准中间液：准确吸取腺苷标准储备液（3.3.1 ）2.5mL 于25mL 容量瓶中，用水 稀释至刻度，摇匀。此溶液浓度为100μg/mL。 3.3.3 腺苷标准系列工作液：分别准确吸取腺苷标准中间液（3.3.2 ）0.1mL 、0.2mL 、0.5mL 、 1.0mL、2.0mL 、5.0mL 于10mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得浓度分别为1.0μg/mL、 2.0μg/mL 、5.0μg/mL 、10μg/mL、20μg/mL 、50μg/mL 的标准系列工作液。临用时配制。 3.4 磷酸二氢钾溶液（0.01mol/L ）：称取1.36g 磷酸二氢钾（3.1.1 ），加水溶解并稀释至1000mL， 经微孔滤膜（3.5 ）过滤，待用。 3.5 微孔滤膜：0.45µm ，水相。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。 4.2 超声波提取器：功率250W ，频率33kHz 。 4.3 分析天平：感量0.01mg 、0.0001g 和0.001g 。 4.4 离心机：转速≥3000 r/min 。 5 分析步骤 5.1 试样制备 5.1.1 试样提取 55 5.1.1.1 固体试样 准确称取粉碎并混合均匀的试样 0.5g~2g （精确至0.0001g ，含待测组分约 0.05mg ~2.5mg ）于50mL 容量瓶中，加入水约30mL ，超声提取20min ，放至室温，用水稀释至刻 度，摇匀，以3000 r/min 离心5min 。再经微孔滤膜（3.5 ）过滤，取续滤液进液相色谱仪分 析。 5.1.1.2 软胶囊试样 取软胶囊剪开，挤出内容物并混匀，准确称取2g （精确至0.0001g ），准确加入等量硅 藻土（3.1.3 ），研至分散均匀，准确称取其中部分（准确至0.0001g ，含待测组分约0.05mg ~2.5mg ），转移至250mL 具塞三角瓶中，并吸取 50.0mL 水，并入三角瓶中，称重 （准确 至0.001g ），加塞超声提取20min ，放至室温，用水补足重量，摇匀，静置澄清或以3000r/min 离心5min 。取上清液，再经微孔滤膜（3.5 ）过滤，取续滤液进液相色谱仪分析。 5.1.1.3 液体试样 准确吸取混匀的试样5.0mL~10.0mL（含待测组分约0.05mg ~2.5mg ）于50mL 容量瓶中， 加入水约 30mL ，超声提取20min ，放至室温，用水稀释至刻度，摇匀，以3000r/min 离心 5min 。再经微孔滤膜（3.5 ）