保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素的测定.pdfVIP

十、保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠李素的液相色谱测定方法。 本方法适用于以银杏叶或银杏叶提取物为主要原料的保健食品中槲皮素、山柰素、异鼠 李素的测定。 2 原理 试样经甲醇提取、酸水解等前处理后，采用液相色谱分离、紫外检测器检测，以保留时 间定性，以外标法定量。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 甲醇（CH OH ）：色谱纯。 3 3.1.2 磷酸（H PO ）。 3 4 3.1.3 盐酸（HCl ）：含量：36%~38% 。 3.2 试剂配制 3.2.1 盐酸溶液（3.0mol/L ）：取盐酸25mL ，加水适量使成100mL，摇匀。 3.2.2 80% 甲醇溶液：将甲醇和水按80+20 的体积比混合均匀。 3.3 标准品 槲皮素、山柰素、异鼠李素标准样品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见表1，纯度 ≥98% ，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 表1 标准样品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 槲皮素 Quercetin 117-39-5 C15H10O7 302.24 山柰素 Kaempferol 520- 18-3 C15H10O6 286.23 异鼠李素 Isorhamnetin 480- 19-3 C16H12O7 316.27 3.4 标准溶液配制 3.4.1 标准储备液（1mg/mL）：分别准确称取槲皮素、山柰素、异鼠李素标准品100mg （准 确至0.1mg ），于100mL 容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。 3.4.2 槲皮素、山柰素、异鼠李素混合标准中间液（200μg/mL ）：分别准确吸取槲皮素、山 柰素、异鼠李素标准储备液各5.00mL 于25mL 容量瓶中，用流动相定容。 3.4.3 混合标准系列工作液：分别准确吸取槲皮素、山柰素、异鼠李素混合标准中间液 0.50mL 、1.00mL、2.00mL 、3.00mL 和5.00mL 于 10mL 容量瓶中，用流动相定容至刻度， 配制成质量浓度分别为10.0μg/mL、20.0μg/mL 、40.0μg/mL 、60.0μg/mL 、100μg/mL 的混合 标准系列工作液。 4 仪器和设备 4.1 高效液相色谱仪：配有二极管阵列或紫外检测器（UV ）。 4.2 分析天平：感量为0.01mg 和0.0001g 。 4.3 超声波清洗器：功率≥250W 。 43 4.4 水浴锅。 5 分析步骤 5.1 试样制备 取片剂、颗粒剂等固体样品适量，研磨均匀；胶囊剂、软胶囊剂取内容物，研磨混匀。 5.1.1 槲皮素、山柰素、异鼠李素的测定 精密称取试样适量（相当于含槲皮素、山柰素、异鼠李素总量约3mg ），加20mL 甲醇， 超声提取（功率250W ，频率33kHz ）30min ，滤过，残渣用甲醇约5mL 洗涤，洗液并入滤 液，加入15mL 盐酸溶液（3.0mol/L ），水浴回流水解3h ，冷却，转移至50mL 容量瓶中， 用甲醇定容至刻度，混匀，经0.45μm 微孔滤膜过滤，取续滤液，作为试样待测液。 5.1.2 游离槲皮素、山柰素、异鼠李素的测定 精密称取试样适量（相当于含槲皮素、山柰素、异鼠李素总量约3mg ），置具塞锥形瓶 中，精密加入80% 甲醇溶液20mL ，密塞，称定重量，超声提取（功率250W ，频率33kHz ） 20min ，取出，放冷，再称定重量，用80% 甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，作为试样待测液。 5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱柱：C18 柱， 150mm ×3.9mm ，5μm，或同等性能色谱柱。 5.2.2 柱温：25℃。 5.2.3 检测波长：360nm 。 5.2.4 流动相：甲醇+0.4%磷酸溶液=50+50 。 5