保健食品中α-亚麻酸及γ-亚麻酸的测定方法.pdfVIP

五、保健食品中α-亚麻酸、γ-亚麻酸的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中α-及γ-亚麻酸的测定方法。 本方法适用于油脂类保健食品中α-及γ-亚麻酸含量的测定。 2 原理 将油脂试样（或试样提取的脂肪），经氢氧化钾皂化，在三氟化硼存在下甲醇酯化，然 后用气相色谱仪分析，采用外标法定量。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的一级水。 3.1 试剂 3.1.1 正己烷（C H ）。 6 14 3.1.2 氢氧化钾（KOH ）。 3.1.3 三氟化硼甲醇溶液：浓度为15%。 3.1.4 甲醇（CH OH ）：色谱纯。 3 3.1.5 氯化钠（NaCl ）。 3.2 标准品 α- 、γ-亚麻酸甲酯标准样品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见表1，纯度≥99.0% ， 或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。 表1 α- 、γ-亚麻酸甲酯标准样品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 α-亚麻酸甲酯 Methy α- linolenate 301-00-8 C19H32O2 292.46 γ-亚麻酸甲酯 Methy γ- linolenate 16326-32-2 C19H32O2 292.46 3.3 标准溶液配制 3.3.1 标准储备液：称取α-亚麻酸甲酯、γ-亚麻酸甲酯标准品（3.2 ）各25.0mg（精确至0.01mg ）， 分别置25mL 容量瓶中，用正己烷（3.1.1 ）溶解并定容至刻度，溶液浓度为1.0mg/mL。贮 存于-18℃冰箱中。 3.3.2 标准工作液：吸取 α-亚麻酸甲酯和 γ-亚麻酸甲酯标准储备液，稀释成含量分别为 0.10mg/mL 、0.20mg/mL 、0.40mg/mL 、0.50mg/mL 的混合标准系列工作液。临用时配制。 3.4 氢氧化钾甲醇溶液（0.5mol/L ）：称取氢氧化钾（3.1.2 ）2.8g ，用甲醇（3.1.4 ）溶解并定 容至100mL，混匀。 3.5 饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.5 ）360g ，溶解于1.0L 水中，搅拌溶解，澄清备用。 4 仪器和设备 4.1 气相色谱仪：配有氢火焰（FID ）检测器。 4.2 分析天平：感量分别为0.0001g 和0.001g 。 4.3 加热式磁力搅拌器。 4.4 标准磨口烧瓶（50mL ）和直形冷凝管。 5 分析步骤 22 5.1 试样制备 5.1.1 脂肪的提取 按GB 5009.6 中规定的方法提取。 5.1.2 皂化 称取 0.100g 油脂（或脂肪）和磁力搅拌子一并放入 50mL 磨口烧瓶中（见图 1）加入 4mL 0.5mol/L 氢氧化钾甲醇溶液，上部连接回流冷凝管，并固定于磁力搅拌器上，由冷凝管 上口向溶液中导入氮气，使反应瓶中始终充满氮气。开启磁力搅拌器，并加热使反应液保持 65±5℃，搅拌回流约15min （至无油滴为止）。 5.1.3 甲酯化 从冷凝管上部加入4mL 三氟化硼甲醇溶液，搅拌（65±5℃），回流约2min ，冷至室温， 从冷凝管上部加入5mL 正己烷继续搅拌5min ，移去冷凝管，加入5mL 饱和氯化钠水溶液， 摇动数分钟，转移至25mL 分液漏斗中分离水与有机相，再加3mL 正己烷洗水相，分离， 弃水相，合并有机相并用正己烷定容至10.0mL （浓度低时吹氮浓缩至1.0mL），供测定用。 5.2 仪器参考条件 5.2.1 色谱柱：FFAP （改性聚乙二醇20M ，30m×0.25mm i.d.0.25μm ） 5.2.2 柱箱温度：215 ℃。 5.2.3 进样口温度：250 ℃。 5.2.4 检测器温度：260 ℃。 5.2.5 氮气：1.5mL/min，载气：50mL/min 。 5.3 定性分析 在上述仪器条件下，分别取标准储备液和试样测定液1.0μL，注入气相色谱仪，以保留 时间来确定α-及γ-亚麻酸甲酯。 5.4 定量分析 试样中α-亚麻酸甲酯或γ-亚麻酸甲酯色谱峰面积或峰高与标准的比较定量