现代生物关键技术重点整理最终版本.docVIP

现代生物技术组成： 生物技术、基因工程、细胞工程、发酵工程、蛋白质工程、分子进化工程、酶定向进化、生物工程下游技术 生物技术：是利用生物体系，应用优异生物学和工程学技术，加工或不加工底物原料，以提供所需多种产品，或达成某种目标一门新型跨学科技术 基因工程：用人工方法把不一样生物遗传物质分离出来，在体外进行剪切、拼接、重组，经过载体将目标基因导入到宿主细胞或个体，从而改变宿主遗传特征或取得基因表示产物技术 细胞工程：是指以细胞为基础单位，在体外条件下进行培养，繁殖，或按大家需求设计改变细胞一些生物学特征，从而取得一些有用物质，或改良生物品种和发明新品技术 发酵工程：利用生物细胞某种特征，经过现代化工程技术手段进行工业规模化生产人类所需产品技术 蛋白质工程：是以蛋白质结构，功效研究为基础，利用生物化学，分子生物学，遗传工程方法，借助计算机信息处理技术支持，从改变或合成编码蛋白质基因入手，定向改造天然蛋白质或设计全新人工蛋白质分子，使之含有特定结构性质和功效，能愈加好为人类服务一个生物技术 分子进化工程：是在试管或试验室中模拟生物分子进化，使长久自然进化在试验中短期能实现 酶定向进化：是在试管中模拟自然进化过程人工进化策略，利用酶基因突变或同类酶基因片段重组，构建某个酶随机基因突变库，经过基因操作方法使这些基因在微生物在表示，人工控制条件筛选出大家所需酶 生物工程下游技术：指从基因工程中取得动，植物和微生物有机体或器官上，从细胞工程，发酵工程和酶工程产物中把目标化合物分离纯化出来，使之达成商业应用目标过程 酶工程:是利用酶，细胞器或细胞所含有特异催化功效，或经过对酶分子结构修饰或改造以改善酶特征，借助于生物反应器和工艺优化，有效发挥酶催化特征生产人类所需产品技术 基因工程基础过程： ①取得目标基因 ②将目标基因和载体连接形成重组DNA ③将重组DNA导入受体细胞 ④筛选出能表示目标基因受体细胞 基因工程工具酶： 基因工程操作中，作为工具对基因进行切割和拼接等操作酶，到现在为止，常见工具酶共300多个 工具酶分类：限制性内切酶、连接酶、聚合酶、碱性磷酸酶、逆转录酶 限制性内切酶：内切核酸酶中能够识别ＤＮＡ分子上一些特定核苷酸序列而且将其切开酶，称为限制性内切酶 有三种：Ⅰ型限制性内切酶 Ⅱ型限制性内切酶 Ⅲ型限制性内切酶 I型限制性内切酶：是多聚体蛋白，含有切割DNA功效，作用时需要ATP、Mg2+和S-腺苷蛋氨酸存在 II型限制性内切酶：是一类分子量较小单体蛋白，作用时仅需要Mg2+存在即可维持活性，它可在特殊位点切割DNA，产生含有黏性末端或其它形式DNA分子片段。EcoRI是最早发觉II型限制性内切酶 III型限制性内切酶：识别一定位点，但切割位点通常在识别位点一侧24bp-26bp处 I型限制性内切酶和III型限制性内切酶切点不固定，不能产生可利用DNA片段。II型限制性内切酶含有控制和估计位点特异性切割性质，而且产生固定DNA片段。基因工程所用限制性内切酶全部是II型限制性内切酶 II型限制性内切酶识别特点和切割特征：①II型限制性内切酶识别序列长度，通常为4-8个碱基，最常见为6个碱基； ②其识别位点通常全部是回文结构； ③产生不一样末端：黏性末端、平齐末端 黏性末端：限制性内切酶错位切割DNA双链而形成互补单链末端（双链DNA中没有配正确碱基末端） 平齐末端：有些限制性内切酶在同一位点平齐切割DNA两条链，而形成两端平整DNA分子 同裂酶：是指来自不一样有机体但识别和切割相同DNA序列酶 同尾酶：起源不一样，识别序列不一样，但切割DNA分子后产生黏性末端相同 杂种位点：由一对同尾酶分别产生黏性末端共价结合形成位点。通常不能被原来任何一个同尾酶识别 限制性内切酶关键用途： ①在特异性位点上切割DNA，产生特意新限制性内切酶切割DNA片段 ②建立DNA分子限制性内切酶物理图谱 ③用限制性内切酶切出相同黏性末端，方便重组DNA ④构建基因图库 DNA聚合酶：以DNA为模板，将DNA由5’端点开始复制到3’端酶。 常见：大肠杆菌DNA聚合酶I大片段（Klenow片段）、耐热DNA聚合酶、 逆转录酶（依靠于RNADNA聚合酶）、T4噬菌体DNA聚合酶、 T7噬菌体DNA聚合酶及其改造测序酶 Klenow片段作用：①补平限制性内切酶切割DNA所产生3’凹端 ②以（32P）标识dNTP补平3’凹端，可对DNA分子进行末端标识 ③对DNA分子3’突出尾进行末端标识 ④在cDNA克隆中，用于合成cDNA第二链 ⑤应用双脱氧链末端终止法进行DNA测序 耐热DNA聚合酶作用：①DNA测序 ②经过聚合酶链式反