2-2 微生物学第二模块实验二 产淀粉酶细菌的分离筛选.pptVIP

实验二 产胞外淀粉酶细菌的分离筛选 第二模块 功能微生物的筛选和选育 实验目的 1.掌握固体平板的配制（倒平板）； 2.了解单菌落划线分离菌种技术、进一步掌握稀释涂布分离菌种技术； 3.掌握分离、鉴定产淀粉酶细菌的方法（水解圈）； 实验原理 在自然界的土壤中存在产淀粉酶的细菌，通过土样悬液稀释涂布和平板划线分离于含有淀粉的培养基上，诱导产生淀粉酶。产淀粉酶的细菌可在菌落周围水解淀粉生成小分子界限糊精、麦芽糖和葡萄糖，滴加碘液，未水解的淀粉呈蓝色，水解圈无色，在淀粉平板上，产淀粉酶菌落周围会出现水解圈。 实验原理 透明圈（H）与菌落直径（C）比值的大小在一定程度上反映了菌株产生淀粉酶的能力： H/C值越大，表明分泌的淀粉酶越多，水解淀粉的能力也就越强。 实验材料 样品：新鲜土壤样品（同学自备）。 培养基：淀粉培养基。 无菌水：带有玻璃珠装有20mL无菌水三角瓶。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌离心管、电子天平、记号笔、玻璃涂棒、酒精灯、火柴。 实验步骤 一、制备淀粉培养基平板：每组制5块淀粉培养基平板。具体制法为：倒入融化好的淀粉培养基（温度为不烫手为宜）并轻轻摇晃混匀，置于桌面冷却平板。在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 二、制备土壤稀释液：称取土壤2g，放入18mL带有玻璃珠的无菌水三角瓶中，振荡5min，即为稀释10－1的土壤悬液。然后在离心管中依次稀释至10－3、10－4稀释度。 实验步骤 三、稀释涂布： 无菌操作法分别吸取10－3、10－4土壤稀释液各0.1mL，分别加在已制好的2块淀粉平板培养基上；用玻璃涂布棒将稀释液在培养机上充分混匀铺平，静置5min；倒置于30℃恒温箱培养24小时。 四、划线分离将10－1土壤稀释液用接种环挑取一环，在一块淀粉培养基上进行划线分离（每人一块）；倒置于房间30℃恒温箱培养24小时。 实验步骤 平板划线的操作方法 实验步骤 五、挑选单菌落转接划线 24小时后，在之前稀释涂布和划线的3块淀粉培养基上选取典型细菌菌落（尽量选取边缘整齐和规则的菌落），并用记号笔进行编号。 然后将编号后的菌落用无菌牙签挑取，在另1块淀粉培养基平板上分别划短线。 实验步骤 六、观察水解圈和测量H/C值 在3块淀粉培养基上加碘液，观察是否有水解圈的产生，并测量其半径，计算H/C值。 对照划线平板和编号菌落的水解圈大小，挑取水解圈最大的一个菌斑，用记号笔将其勾选出来，并在划线平板上标记好。 将划线平板置于培养箱30℃培养。 实验结果 1.拍照纪录筛选培养基平板上的水解圈； 2.列表记录单菌落数量、无水解圈菌落数量、有水解圈菌落数量； 3.选取若干个(6个左右)有水解圈的测量其大小及菌落直径，计算H/C值。