临床微生物学检验：细菌的生物化学鉴定技术.pptVIP

试管法 玻片法 2.过氧化氢酶（触酶）试验( Catalase test) 应用：用于革兰阳性球菌的初步分群。 触酶 H2O2 H2O 出现气泡 + O2 3.硝酸盐还原试验(Nitrate reduction test)原理 对氨基苯磺酸 ?-萘胺 ?-萘胺偶氮苯磺酸 亚硝酸盐 * * 原理：有些菌可还原硝酸盐为亚硝酸盐或氨和氮等，前者可与?-萘胺和对氨基苯磺酸反应，生成红色偶氮化合物。硝酸盐还原试验就是测定还原过程中所产生的亚硝酸盐。 结果：立即出现红色为阳性；若没有红色出现，原因可能为：①真正阴性，可加锌粉于阴性反应物中，变成红色，为真正阴性；②或假阴性（真阳性），加锌粉不变色，因生成的亚硝酸盐被进一步还原成NH3、N2 等。 锌 硝酸盐 亚硝酸盐 硝酸盐没有被还原 硝酸盐还原试验(几种结果演示) 硝酸盐培养基 变红 不变红色 硝酸盐 亚硝酸盐 硝酸盐 氨+氮 +试剂（对氨基苯磺酸、 ?-萘胺） Zn 变红 不变红色（ ） 硝酸盐 亚硝酸盐 Zn 本试验在细菌鉴定中广泛应用。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐；铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌等非发酵菌可还原硝酸盐产生氮气。 + + - * * 1． DNA酶试验 在革兰阳性球菌中只有金黄色葡萄球菌产生DNA酶，在肠杆菌科中沙雷氏菌产生此酶。 （五）其他生化试验 * * DNA酶试验原理： DNA酶 长链DNA 寡核苷酸链（可被酸沉淀：白色） （可溶于酸：透明） 2.血浆凝固酶试验 作为鉴定葡萄球菌致病性的重要指标，也是葡萄球菌鉴别时常用的一个试验。 致病性葡萄球菌具有两种凝固酶: 结合凝固酶（结合在菌细胞壁上，相当于纤维蛋白原的受体） 游离凝固酶（作用类似凝血酶原，激活后可使血浆凝固） 纤维蛋白原 纤维蛋白 凝固酶 血浆 液态 凝固 （－） （＋） （－） （＋） （Coagulase test） 玻片法 试管法 * * 3． CAMP试验 在链球菌中，只有B群 链球菌产生CAMP因子，可促进葡萄球菌产生的beta-溶血素溶解红细胞的能力。 金黄色葡萄球菌 4.胆汁溶菌试验 原理：某些细菌能产生自溶酶使细菌溶解，而胆汁能激活自溶酶加快细菌溶解。 应用：肺炎链球菌的鉴定 5.卵磷脂酶试验 原理：有的细菌产生卵磷脂酶 (α-毒素)，在钙离子存在时， 此酶可迅速分解卵磷脂，生成 浑浊沉淀状的甘油酯和水溶性 磷酸胆碱 应用：主要用于厌氧菌鉴定。 被检菌划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于35℃培养3--6h * * （1）O/129抑菌试验 用于弧菌科的属间鉴别，弧菌属、邻单胞菌属 对O/129敏感，而气单胞菌属耐药。 （2）杆菌肽试验 用于A群链球菌与非A群链球群的鉴别（抑菌圈直径≥10mm敏感） （3）奥普托欣（Optochin）试验 主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别（抑菌圈≥14mm为敏感）。 6.常见抑菌试验 肺炎链球菌对optochin敏感 （抑菌圈≥14mm) A群链球菌对杆菌肽敏感 （抑菌圈≥10mm) * * 7. 复 合 生 化 试 验 * 克氏双糖铁培养基 ②分解葡萄糖+乳糖 产酸(乳糖多，产酸多） 斜面和底层均变黄 (Kligler Iron Agar,KIA) 组成：无糖培养基+1份葡萄糖+10份乳糖 + 铁盐 + 酚红 营养 底物 底物 底物 指示剂 原理： ①只分解葡萄糖 产酸（葡萄糖少，产酸量少） 斜面产生的酸被氧化、挥发、中和，呈红色 底层缺氧，不氧化，黄色 ③产生硫化氢 + 铁盐 FeS 黑色沉淀 应用：检测肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和产H2S能力。 * * 细菌在KIA上分解乳糖或葡萄糖结果示意图 乳（－）葡（＋）H2S(-) 乳（+）葡（+）H2S(-) 乳（-）葡（+）H2S(+) 动力(-) Indol(-) 脲酶(-) 动力(-) Indol(+) 脲酶(+) 对照 (2)动力/吲哚/尿素酶试验（MIU） （MIU） （MIU） （MIU） 吲哚实验/甲基红实验/VP实验/枸橼酸盐利用实验(IMViC) * * * 概念：不同细菌所具有的酶系统各不相同，对营养物质的利用能力各异，它们在代谢过程中所产生的代谢产物也不同，利用生物化学方法直接或间接检测细菌的代谢产物，从而鉴别细