磺胺类SAr酶联免疫分析ELISA.docxVIP

磺胺类（SAr）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 1酶免分析步骤 1.1实验须知 1.1.1实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（ 25土2C），时间约2小时。回温至 室温（25±2C）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于 2~8C干燥保存 注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。 使用后请立即将试剂放回 2~8C保存 1.1.3请不要改变分析程序 1.1.4请使用精确的微量移液器 1.1.5操作一旦开始，请不要中断任何程序 1.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作 1.1.7为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样 1.1.8加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面 1.2分析步骤 1.2.1预先进行编号，标记 B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测 1.2.2取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回 2~8C保存 1.2.3样品稀释液（10X）、浓缩洗涤液（10 X ）稀释成工作液（蒸储水或去离子水稀释） 在BC^L中加入50 10.0 ng/ ml 标准品溶液 在各标准孔中加入50 1的标准品溶液 在各样品孔中加入50 1样品溶液 1.2.7在所有孔中加入50 1的磺胺类（SAr）抗体酶结合物 1.2.8轻轻晃动反应板几秒钟。 1.3 37 C温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差） 1.3.1甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板 5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中 液体。 1.4反应 1.4.1洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入 50 1显色液A,再加50 1 显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀 37 C 温浴 10min 每孔中加入50^ 1终止液，混匀 在450nn^检测吸光度，结果在 5min内读取。 2结果计算 2.1定量分析 2.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（ B）除以第一个标准（0标准） 的吸光度值（B0）再乘以100%即百分吸光度值。 B一标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B卜0 g/L标准溶液的平均吸光度值 2.1.2以磺胺类（SAr）浓度的对数值为 ^由，百分吸光度值为 Y轴，绘制标准曲线图。根据样 品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为磺胺类（ SAr）浓度的对数值，求 得反对数即为测定液中磺胺类（ SAr）浓度C （ppb） 2.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释 倍数。 2.2半定量测定 2.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光 度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。 2.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色 深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。 3特异性 物质交叉反应 磺胺嚅嚏（S或者SDZ 100% 磺胺恶哩（SMZ 63% 磺胺嚷哩（ST） 195% 磺胺甲基嚅嚏（SM1 12% 4试剂盒参数 本试剂盒检测下限为0.05ppb BC^光度最佳值应大于1.0 试剂盒吸光度板内误差小于 8%,板间误差小于15%。 用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于 80 %。 5标准曲线模式（仅供参考） 试剂盒提供的标准曲线范围为 0.1ppb~8.1ppb 。 6分析限制 本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如 HPL以 GC/MSm以确证。