免疫蛋白酶体在伪狂犬病病毒Bartha株感染中的变化.pdfVIP

摘 要 机体在炎症反应或在氧化应激的情况下，细胞内蛋白酶体会转变成免疫蛋白酶体并在炎症类 疾病中发挥作用。伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV ）作为一种宿主广泛的α-疱疹病毒，可以 在多种宿主脑部建立感染并引起中枢神经系统炎症反应。然而，PRV 在引起的脑部炎症过程中免 疫蛋白酶体的水平是否发生变化，尚有待阐明。 4 为了研究免疫蛋白酶体在伪狂犬病毒感染中的变化，本实验通过皮下注射剂量为 6.8×10 TCID50 的PRV 弱毒株Bartha K61 人工感染6 周龄C57BL/6 雄性小鼠，诱导小鼠脑部产生炎症 反应。组织病理学实验结果表明，小鼠感染PRV 后，脑部产生非化脓性脑炎，表现为血管周围单 核细胞浸润，出现血管套现象。荧光定量结果表明在感染第7 d 时脑部免疫蛋白酶体亚基LMP2 、 LMP7 和LMP10 的转录水平均显著上调 （P 0.001 ）；Western Blot 结果显示在感染第7 d 时可以 检测出脑部免疫蛋白酶体亚基LMP2、LMP7 和LMP10 均被诱导表达，并随着感染天数的延长而 增加。荧光定量PCR 结果显示与对照组相比，自感染第7 d 起，典型促炎性因子IFN-γ 、IL-6、 IL-1-β 和TNF-α 的mRNA 转录水平显著上调（P 0.01 ）。将免疫蛋白酶体亚基LMP10 敲除之后， PRV 感染造成的临床症状和病理变化并没有缓解或加重，但小鼠脑部的病毒载量表现出明显的下 降 （P 0.01 ）；LMP10 的敲除影响了LMP2 和LMP7 的转录与表达；促炎性因子的转录水平也因 4 LMP10 亚基的敲除而显著下调 （P 0.001 ）。为了进一步验证以上实验结果，以6.8×10 TCID50 的 PRV Bartha K61 株感染小鼠传代小胶质细胞BV2 和小鼠传代神经细胞N2A, 于感染后第0 h 、3 h 、6 h 、12h 、24 h 和36 h 检测免疫蛋白酶体各亚基转录水平与蛋白表达水平，结果表明PRV 感 染可以诱导BV2 细胞免疫蛋白酶体上调却无法诱导N2A 产生免疫蛋白酶体。使用免疫蛋白酶体 LMP7 亚基特异性抑制剂ONX-0914 处理BV2 后虽然对PRV 的复制没有影响，但IFN-γ 与TNF- α 的转录明显被抑制 （P 0.01 ）。 本实验建立了PRV 人工感染小鼠脑炎模型，利用该动物模型首次研究了免疫蛋白酶体在PRV 感染诱导的脑炎中的变化以及在免疫蛋白酶体亚基LMP10 缺失的情况下对PRV 致病性的影响， 在细胞水平验证了免疫蛋白酶体亚基LMP7 被抑制的情况下对促炎性细胞因子产生的影响，表明 免疫蛋白酶体在PRV 感染中与促炎性细胞因子的产生具有相关性。 本研究的实验结果表明，PRV 的感染可诱导脑部免疫蛋白酶体发生变化。这一结论为研究免 疫蛋白酶体在中枢神经系统疾病的致病机制奠定了基础，也为对抗 PRV 感染诱导的脑部炎症反 应的研究提供了新的见解。 关键词：PRV ，中枢神经系统炎症，免疫蛋白酶体，促炎性细胞因子 I Abstract Upon oxidative stress or in the context of inflammation reaction, proteasomes are transformed into immunoproteasomes, which plays an important role in inflammatory diseases. Pseudorabies virus (PRV), as a member of alpha-herpesvirus with a wide range of hosts, can establish infection in diverse host brains and cause