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唾液淀粉酶最适pH值的测定实验 实验目的 1?掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。 2?掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。 3?熟悉影响酶促反应速度的因素。 实验原理 1 ?酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动 剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度 的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同 程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色 一紫红色一黄色, 此为定性观察。 2 ?进一步利用郎伯一比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液 的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当 唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于 660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同, 吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以 了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液 淀粉酶的最适PH。 A660 PH 最适PH 实验器材 仪器材料：方盘，试管架，中试管，毛刷，吸耳球，玻璃铅笔, 小烧杯，白瓷板，坐标纸，漱口杯。0.1ml、0.5ml. l.Omk 2.0mlx 5.0ml. 20?0ml刻度吸管，胶头滴管，37 C恒温水浴箱，分光光 度计，电磁炉。 试剂药品:0.02%淀粉溶液.0?2mol/L磷酸二氢钠溶液、 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 碘液；称取碘2g,碘酸钾2g,溶于 300ml蒸锚水中。 实验步骤： 缓冲液的配置 pH 0.2mol/L 0.2mol/L NaH2P04（ml） Na2HP04（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92.0 8.0 5.9 90.0 10.0 6.0 87.7 12.3 6.1 85.0 15.0 6.2 81.5 18.5 6.3 77.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 37.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51.0 49.0 6.9 45.0 55.0 7.0 39.0 61.0 7.1 33.0 67.0 7.2 28.0 72.0 7.3 23.0 67.0 7.4 19.0 81.0 7.5 16.0 84.0 7.6 13.0 87.0 7.7 10.5 89.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7.0 93.0 8.0 5.3 94.7 2、唾液的取法: 先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉，再将一 块消毒脱脂棉球用银子放在备取者的舌下，过大约半分钟至一分 钟，备取者感觉棉球湿透，用镣子将棉球取出，置于烧杯中，倒 入蒸锚水，用玻璃棒充分搅拌，将棉球取出，即制成唾液实验备 用液。 （2） 让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一 些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。 （3） 准备一个干净的杯子，用手扯住嘴角，等待大约2分钟后, 就可以获得唾液。 实验方案 (1) 唾液的稀释 :取20支试管， 分别编上号00 ~ 09 编号 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 唾液 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 蒸锚水4.9 9.9 14.9 19.9 24.9 29.9 34.9 39.9 44.9 49.9 （2）最适唾液稀释倍数的选取 取上述稀释的唾液各lml,分别加入另取的10支试管中，分别 编上A~J号的试管里，向10支试管内同时加入lml的0.02% 的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴几分钟后取出，滴 加1-2滴碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变为淡黄色最 快的一支，记录其稀释倍数，作为下面实验的最适唾液稀释倍数。 （3）最适PH的测定 编号 123456789 PH 颜色 660 A660 实验结果 最适PH= ? 实验分析 思考题 1） 本实验为什么要寻找较合适的唾液稀释倍数？ 答:为了跟好的找到唾液淀粉酶的合适浓度，是的最后测定的 最适PH精确。 2） 在研究PH对酶促反应速度的影响是，前提条件是什么？ 答：温度，底物浓度，酶浓度保持恒定。 3） 所测吸光度中，吸光度值最小溶液所对应的PH 一定是唾液 淀粉酶的最适PH吗？ 答：不一定，最适PH值应当是根据A?PH的图来确定，图的最 低点为最适PH,不一定就是所测最小的吸光度值。 4）总结本实验的注意事项 使用分光光度计时要调零 反应时必须是在37C。的水浴中。 参考文献 科学出版社常东胜，潘洪明 医学化学实验 科学出版社