范文3、RNA指导的DNA复制(逆转录)及病毒的复制.ppt

裸露病毒的吸附 最新.课件 * 囊膜病毒的吸附 最新.课件 * （二）穿入(penetration) 病毒体吸附在宿主细胞膜上后，可通过数种穿入方式进入细胞： 1.无囊膜的病毒 一般经过细胞膜吞入，称为病毒胞饮,如腺病毒、小RNA病毒等 最新.课件 * 病毒胞饮 最新.课件 * 2. 有囊膜的病毒 囊膜与宿主细胞膜融合，病毒的核衣壳直接 进入细胞浆内 病毒胞饮: 细胞膜吞入 最新.课件 * (1) 膜融合后进入 最新.课件 * (2) 病毒胞饮 最新.课件 * 二、脱壳(uncoating) 不同病毒脱壳方式不一，多数在宿主细胞溶酶体酶作用下脱壳，释放出基因组核酸。 最新.课件 * 三、生物合成(biosynthesis) 病毒基因组一旦从衣壳中释放后，就利用宿主细胞提供的低分子物质合成大量的病毒核酸和结构蛋白。 早期，根据病毒基因组转录成mRNA、指令合成转录合成所必需的复制酶和一些抑制蛋白； 生物合成阶段，病毒处于隐蔽期 病毒的生物合成过程可基本归为6大类：双股DNA病毒、单股DNA病毒、单正股RNA病毒、单负股RNA病毒、逆转录病毒和双股RNA病毒。 最新.课件 * 最新.课件 * 病毒DNA 早期mRNA 早期蛋白（酶等） 子代病毒DNA 晚期mRNA 病毒结构蛋白 子代病毒子 双股DNA病毒 复制 宿主细胞转录酶 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * RNA replication Reverse transcription=replication 最新.课件 * 逆转录酶 （reverse transcription) 1964年，Temin发现Rous肉瘤病毒等RNA病毒所造成的感染可被DNA合成抑制剂遏制。 表明：RNA肿瘤病毒的RNA复制过程中要合成DNA。 Temin又发现放线菌素D能抑制致癌RNA病毒的复制，但不能抑制一般RNA病毒的复制。 表明：转录对于RNA病毒增殖是必需的。 最新.课件 * Temin提出前病毒假说：原病毒DNA是RNA肿瘤病毒在复制和致癌中的中间物。 1970年，Temin 在Rouse肉瘤病毒、Baltimore在白血病病毒中发现逆转录酶。 最新.课件 * 多功能酶： 1、RNA指导的DNA聚合酶活性 2、RNA酶H（RNaseH）活性：水解RNA-DNA杂交体上的RNA 3、DNA指导的DNA聚合酶活性：合成互补DNA。 4、没有3`→5`外切酶活性。 最新.课件 * 特点： 含有Zn2+（是否有锌指结构、DNA结合功能？） DNA合成反应要求有模板和引物。 需适当浓度的二价阳离子（Mg2+、Mn2+） 5’ →3’合成方向 → 最新.课件 * 逆转录病毒的基因组复制过程 第一阶段：合成负股cDNA的大部分 第二阶段：以负股DNA为模板合成一小部分正股DNA链。 第三阶段：完成cDNA的全部复制。 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 最新.课件 * 乙肝病毒基因组的复制 其复制需通过逆转录过程经RNA中间体实现 ，其DNA聚合酶也是一种逆转录酶。 最新.课件 * 最新.课件 * 逆转录病毒：RNA → DNA → RNA 乙肝病毒：DNA→RNA → DNA 最新.课件 * 试管内cDNA的合成 常用于获得或研究真核生物基因的方法。提取某一种特定的mRNA，经逆转录生成的cDNA可代表某一特定基因。 常用的逆转录酶有两种： 来自鸟类成髓细胞瘤逆转录病毒称为AMV-RT； 来自鼠白血病毒称为MMLV-RT。 最新.课件 * 最新.课件 * 病毒RNA复制的主要方式 1、病毒含有正链RNA，如灰质炎病毒。RNA（+） →蛋白质（酶）→ RNA复制 2、病毒含有负链RNA和复制酶如狂犬病毒。RNA（-） → RNA（+） →蛋白质、复制病毒RNA（-）。 3、病毒含有双链RNA和复制酶。如呼肠孤病毒。双链RNA → RNA（+） →蛋白质→ RNA（-） →双链RNA 4、逆转录病毒。 最新.课件 * 讨论题 如何知道DNA复制中先要有RNA引物的合成？ (原料/新合成DNA序列分析/专一核酸酶水解) 最新.课件 * 病毒的复制 病毒在活细胞内，以其基因为模板，在酶的作用下，分别合成病毒基因及蛋白质，再组装成完整的病毒颗粒，这种方式称为复制（replication)。 从病毒进入宿主细胞开始，经过基因组复制和病毒蛋白合成，至释放出子代病毒的全过程，称为一个复制周期。 病毒的复制周期主要包括吸附和穿入、脱壳、