电子显微镜的应用和诊断.ppt

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;电镜的起始;;;几种常用电镜技术;1. 2 电镜酶细胞化学技术;(1) 酸性磷酸酶, 主要定位于溶酶体及高尔基体, 是两者的标志酶; (2) 葡萄糖262磷酸酶, 定位于内质网及核膜, 是两者的标志酶; (3) 琥珀酸脱氢酶, 定位于线粒体内膜, 是其标志酶; (4) 髓过氧化物酶, 定位于粒细胞和单核细胞的线粒体、核膜、高尔基体及胞质颗粒, 在原始细胞阶段的白血病可依靠该酶来进行细胞分型和鉴别诊断; (5) 血小板过氧化物酶, 定位于巨核细胞的核膜、线粒体及致密管道系统, 对巨核细胞性白血病的诊断有重要作用。 ;1. 3 免疫电镜技术;(1) 辣根过氧化物酶, 相对分子质量较小, 标记后可用光镜及电镜观察, 多用于细胞内标记; (2) 胶体金颗粒, 可根据需要制备成不同大小(常用直径为5、10、15 nm ) , 能用于细胞内及细胞表面标记; (3) 铁蛋白颗粒, 相对分子质量较大, 一般用于细胞表面标记, 但不如胶金标记优越, 现使用较少。根据标本来源、种类和疾病诊断的需要可做包埋前和包埋后标记, 也可进行单标、双标或多标。 ;1.4 扫描电镜技术;免疫组织化学技术与电镜的比较;当时许多人认为人类疾病的诊断进入了免疫组化的时代,免疫组化将取代电子显微镜成为人类疾病诊断的一个重要的手段。不少医疗单位越来越忽视电镜在疾病研究、诊断中的作用,甚至错误地认为今后的疾病诊断将不再需要电子显微镜的助,有了操作简单、快捷、费用低廉的免疫组化技术以及近年来发展起来的分子杂交、PCR、细胞基因分析等更加先进的诊断技术,足以解决人体疾病诊断中的难题。;要想让电镜仍然发挥出应有的或更大的作用,首先要进一步提高和发展现有的电镜技术: 进一步缩短电镜标本的制备时间,发现并应用新型固定剂、包埋材料等,简化规范电镜标本制备过程,并适用于多种类型的标本(新鲜标本及甲醛固定甚至石蜡包埋后的标本,实体组织及液体标本等); ;进一步简化,改进电镜酶细胞化学技术、胶体金免疫电镜技术等,不但保持其原来的特异性、敏感性,更要降低对标本的要求,更适应于临床的需要,使得这些技术能更广泛地应用于常规电镜诊断。 其次,除了进一步拓宽常规透射电镜、扫描电镜、电子能量色散谱、微区电子衍散等。; 在人体疾病诊断中的应用范围,还要积极地将扫描隧道显微镜、原子力显微镜等新型的超显微镜引入到人体疾病的研究及诊断中,开拓病理诊断的新领域。除了开展活检、外检组织的电镜检查,还要积极开展细胞学???电镜检查。;此外,要提高电镜诊断水平,还要注意电镜工作者、病理医生和临床医生之间的协作,注意培养提高动用临床医疗知识、病理知识、超微结构观察及电镜技术综合知识的能力,积累各种疾病电镜诊断的要点,总结出各种疾病诊断的标准。 要积极参与电镜诊断各种形式的学术交流,不断充实、更新知识。; 在我国,电子显微镜以往主要建立于大专院校及科研究院(所),部分电镜工作者缺乏电镜诊断的经验,而临床医生、病理医生往往又缺乏电镜知识,忽视电镜在疾病诊断中的作用。因此,要推动我国电镜诊断的进一步发展,积极进电镜工作者、病理医生和临床医生之间的协作及沟通显得尤为重要。;电镜在疾病诊断中的应用;1.电镜对病毒性疾病的诊断;依据电镜下病毒形态结构特征,包括衣壳的对称性、壳微粒数和排列方式、核衣壳在细胞内复制组装的部位、病毒体的形态和大小以及螺旋对称核衣壳的直径等,再结合病毒的核酸和蛋白分子生物学特性,可以对致病病毒进行鉴定和分类。 电镜负染技术是一种快速简便的操作程序,也是病毒性致病因子电镜诊断常用的方法,在新病毒的发现中作出了重要贡献。免疫电镜技术的应用更提高了病毒快速诊断的敏感性和特异性[4]。;另外,电镜技术对研究某些病毒感染的发病机理也很有帮助。例如新近Geisbert等[5]报道了马尔堡出血热病人的电镜观察结果是先前无人报道过的。他们发现在胰岛中有病毒感染,在其他中,巨噬细胞是最早受病毒攻击的靶细胞。肝细胞、肾上腺皮质和髓质细胞以及纤维母细胞也是病毒复制的重要部位。;2.电镜对肿瘤的诊断;对于这些肿瘤,光镜有时难以明确诊断。免疫组织化学方法虽然对肿瘤的诊断发挥了很大作用,但由于肿瘤的多向分化及部分市售免疫组化试剂存在明显的交叉反应性,所以应用免疫组化染色诊断肿瘤有一定的局限性。而电镜技术的应用为肿瘤的诊断提供了一条新的途径。 如对神经内分泌肿瘤的诊断即为佐证。神经内分泌肿瘤都含有神经内分泌颗粒,不论其分化程度如何,是原发的还是转移的,在电镜下都很易识别。另外,通过对此类瘤细胞分泌颗粒及其他超微结构特点的识别,还可以对一些内分泌肿瘤作进一步的功能分类。以上这些都是光镜难以做到的。;电镜对下列肿瘤的鉴别诊断可起到重要作用: ①区别癌、黑色素瘤和肉瘤; ②区别腺癌和间皮瘤; ③在前纵膈肿瘤中可区别胸腺瘤、胸腺

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