柱层析—分光光度法测定益母草中总黄酮含量.docxVIP

柱层析一分光光度法测定益母草中 总黄酮含量 【摘要】目的建立益母草药材总黄酮 含量测定方法，并对药材资源进行初步考察。 方法以芦丁为对照品，样品经聚酰胺柱分离 纯化，三氯化铝试剂显色后，采用紫外分光 光度法在412 nm波长处测定总黄酮含量。 结果芦丁在? 从g/ml范围内与吸光度有良 好线性关系，r= 6，平均回收率为102% RSD=3%结论该方法操作简单、准确，可作 为益母草药材的质量分析方法。 【关键词】益母草；总黄酮；柱层析一 分光光度法 Abstract : ObjectiveTo establish the method for the quantitative determination of total flavonoids in Herba Leonuri, make the prime examination of the sample was treated with a polyamide column for separation and purification ,and was colorated with aluminium trichloride ,and then,the content of flavone in the sample was determined at the wavelength of 412 nm by ultraviolet spectrophotometer with rutin as showed a good linear relationship in the range of ?昏 g/ml , r= the average recovery of the added sample was 102% and RSD was 3% .ConclusionThe method is simple and accurate. It can be used for the quality control. Key words : Herba Leonuri; Total flavonoids; Column chromatogram UV spectrophotometry 益母草为唇形科益母草属植物 Leonurous heterophyllus Sweet 的干燥地上部分，性 味苦、辛、微寒，归肝、心包经，具有活血 化淤、利尿消肿的功效：1]o主要含生物碱、 二站、环烯醍站昔、黄酮、有机酸等成分：2]o 〈〈中国药典》以生物碱作为益母草药材的含 量测定指标。近几年来，黄酮成分开始受到 专家和学者的关注。益母草中含有多种黄酮， 如芦丁、榔皮素、山奈素及昔，洋芹素、芫 花素及昔等:3］,研究表明益母草黄酮在心 血管方面药理作用显着［4］。益母草药材和 制剂中总黄酮含量测定报道不多， 绝大部分 是药材经初步提取后直接测定， nO^OBAMHAP 首次将柱层析引入 益母草药材和制剂的含量分析［5］。目前， 益母草总黄酮含量测定仍存在较大不足， 如 提取、除杂方式选择混乱导致测定干扰成分 较多、显色方法选择缺乏依据等等，同时未 见益母草药材中总黄酮资源的报道。 本实验 通过薄层色谱模拟柱层析条件，确定了药材 的除杂方式，对益母草药材总黄酮含量测定 方法进行了系统考察，并测定了 6个地区益 母草药材的总黄酮含量。 1仪器与试药 Aglient8453 紫外可见分光分析仪，752-N 型分光光度计，BP211Dsartorius 电子天平。 益母草。 芦丁、榔皮素、山奈素对照品；聚酰胺薄 膜、柱层析用聚酰胺 80?100目；甲醇、无 水乙醇、氯化铝、氢氧化钠、硝酸铝、亚硝 酸均为分析纯。 2方法与结果 显色方法的选择亚硝酸钠-硝酸铝-氢 氧化钠和三氯化铝为总黄酮测定中最常用 的显色剂:6, 7]。前者显色后测定波长为 510 nm左右，后者在410 nm或270 nm附近。 因益母草药材在500 nm处有较多的干扰吸 收，且样品溶液中存在的桶￥皮素、山奈素等 黄酮成分，以亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显 色后在500 nm处吸收较弱或无吸收:8], 因此，采用亚硝酸钠一硝酸铝一氢氧化钠做 显色剂并不理想。所以选择三氯化铝为显色 剂，芦丁为对照品，进行总黄酮含量测定。 除杂条件的确定取益母草药材适量， 置 索氏提取器中，加三氯甲烷回流提取至提取 液无色，三氯甲烷液蒸干，残渣加甲醇 1 ml 使溶解为供试品溶液 A。药渣挥去三氯甲烷， 加甲醇继续提取至无色，提取液蒸干，残渣 加甲醇1 ml使溶解为供试品溶液 B。将以上 样品及相应对照品溶液分别点样于聚酰胺 薄膜上，先以水展开，水展开后将薄膜取出 晾干，再以不同浓度乙醇展开，展开后的聚 酰胺薄膜喷以三氯化铝试液，于 365 nm