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柯萨奇病毒B3致病毒性心肌炎动物 模型的建立 【关键词】病毒性心肌炎物模型柯萨奇 病毒 病毒性心肌炎的治疗一直是临床工作者非 常关注的问题［1］。建立一个稳定而可靠的 病毒性心肌炎动物模型，对治疗心肌炎的药 物筛选及药效研究是必不可少的，心肌炎动 物模型可以提供明确的病原， 进行全面的心 肌病理检查，适用于临床与基础研究。我们 在观察各种药物治疗柯萨奇病毒模型鼠的 作用中（另文报告），首先进行了 CVB3的致 病模型研究，现报告如下。 1材料和方法 实验动物与分组4周龄雄性近交系 BALB/C小鼠，体重（17 土 2） g ,购于湖北省 实验动物研究中心，所有小鼠均为 SPF级 将35只小鼠分为2组:A组为实验组25只， B组为正常组10只。 细胞与病毒株Hep2细胞由武汉大学典型 培养物保藏中心提供。CVB3Nancy株为武汉 大学医学院病毒学研究所保存。病毒经Hep2 细胞活化增殖，CPE^ 75恕上时收获，其滴 度为 107TCID50/ ml。 模型建立动物室保持空气流通，相对湿 度在60就右，温度（22 土 2）C。注射部位常 规消毒后，腹腔注射10-5即100TCID50/ ml CVB3 ml,正常组腹腔注射等量 mmol/L磷 酸盐缓冲液ml。接种病毒时间定为第0天， 至第7天时随机从各组取 5只小鼠，于眼眶 采血后处死小鼠留取心脏，将血离心分装、 血浆冻存，将心脏冲洗称重后，用 10御醛 固定待做病理组织学检查， 剩余小鼠饲养至 第21天时，全部处死留取心脏，将心脏冲 洗称重后，用10%3醛固定待做病理组织学 检查。 心脏重量/体重比值与生存率存活达第 21天者视为存活，各组小鼠处死之前称重， 心脏称重前用滤纸吸净。 组织病理学检查 各组小鼠用10%^醛固 定后石蜡包埋切片，HE染色，镜下观察组织 病理学改变并记分。炎症细胞浸润，心肌坏 死占每张心脏切片 25耕1分，25吟50%十 2分，50吟75衙 3分，75衙 4分。 血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）的生化测定 采用TOSH旧A-40FRS动生化分析仪测定血 清CK-MB勺含量。 统计学处理方法 率的比较用x2检验，组 间计量资料采用t检验。 2结果 HW/B妣值与生存率 A与B组HW/BW匕值 结果分别为和，两组比较 P,差异有统计 学意义。A组20只小鼠，21 d生存率为％ 第1?第6天共死亡2只，而第7?第12天 死亡8只，第13?第21天仅死亡1只，死 亡高峰在第7?第12天；B组无一只死亡。 病理学检查结果 A组小鼠心脏外膜肉眼 可见少量白色点状、条纹状、斑块状以及出 血点等。B组无此现象。CVB3^染小鼠后第 7天炎症细胞灶性浸润，分布在溶解坏死的 心肌周围（见图1）,更有意思的是发现大量 淋巴细胞围绕神经组织浸润（见图2）。 组织学检查结果第7天时从各组随机抽 取5只小鼠光镜检查，发现A组小鼠心肌均 有变性、坏死、炎症细胞浸润或有钙盐沉着， 组织评分最低分为分，最高分为 4分；B组 未发现炎症细胞浸润与心肌坏死。 心肌酶CK-MB吉果 第7天时A组小鼠为 （土）U/L , B组为（土 ）U/L，两组比较 Pv。 3讨论 本实验证明：Balb/c小鼠腹腔注射 CVB3W 毒可导致严重的心肌炎症。 心脏的病理与组 织学表现与国内外［2 , 3］报道基本一致。 Balb/c小鼠对嗜心肌病毒极具敏感性，腹 腔接种CVB3L、肌炎诱发率可达100%本实 验接种病毒小鼠心脏大体解剖可见心外膜 心肌100观出现白色点状、斑块状或者条纹 状改变，病理切片均证实心肌存在严重病变。 本实验在第7天时从各组中随机抽取 5只小 鼠进行光镜检查，发现A组小鼠炎症细胞浸 润主要是淋巴细胞、单核细胞和少量的中性 粒细胞，和熊丁丁等报道相吻合。更有意思 的是我们发现炎症细胞围绕心脏神经组织 浸润较多见，多为单核淋巴细胞。 现在认为病毒对心脏的直接侵犯和机体的 免疫反应是病毒性心肌炎的主要发病机制 受损的心肌细胞引起机体自身免疫反 应，即炎症细胞对正常心肌细胞进行攻击， 引起心肌细胞死亡及心肌病理变化。同时， 病毒感染心脏后，可诱导大量炎症细胞因子 产生。干扰素家族、白细胞介素家族、肿瘤 坏死因子等均参与心肌炎的发病发展过程。 众所周知，炎症细胞以及细胞因子有助于清 除病毒，但同时对心肌有损伤作用，其最终 意义在于其有利与不利作用的强弱对比。 我们将心肌炎小鼠用于药物疗效研究，发 现模型的重复性与稳定性好，效果令人满意 本心肌炎动物模型可用于研究心肌炎的自 然病程以及药物治疗心肌炎的疗效及其作 用机制。 【参考文献】 [1] Zaidi SH , Hui CC,Cheah AY, et al. Targeted overexpression of elafin prote